Faculty Profiles - WAKAI Takuya

MISC - WAKAI Takuya

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精子・卵子研究から生殖補助医療への新たな展開減数分裂と卵割におけるミトコンドリアの細胞間分配

若井拓哉

日本卵子学会誌 1 ( 1 ) S5 - S5 2016.4

マウス卵子におけるミトコンドリアの特性

若井拓哉

岡山実験動物研究会報 ( 32 ) 9‐11 - 11 2016.4

IVM中のブタ小中卵胞由来COC,裸化卵母細胞,卵丘細胞内のcAMPおよびcGMP量

奥平裕一, 若井拓哉, 舟橋弘晃

Journal of Reproduction and Development 61 ( Suppl Japanese Issue ) J91 - j91 2015.9

Language：Japanese Publisher：(一社)日本繁殖生物学会

【目的】体外成熟（IVM）中の細胞内cAMPとcGMP量の劇的な変化は，卵母細胞の減数分裂再開に大きく関与している。本研究は，卵丘細胞-卵母細胞複合体（COC），裸化卵母細胞（DO）および卵丘細胞塊（CC）内のcAMPとcGMP量のIVM中の変動を，小卵胞（SF：直径1–3 mm）および中卵胞（MF：3–6 mm）間で比較した。【方法】SFまたはMFからCOCsを採取し，24時間IVMを行った（eCG，hCG，dibutyryl cAMP添加mPOM中で20時間培養，その後4時間はそれらを不含のmPOM中で培養）。IVM培養開始0，10，20，24時間に，COCsを回収し，COC，DO，CCそれぞれのcAMPとcGMP量をELISA法で測定した。また，IVM培養開始0, 10, 20時間に，COCあたりの卵丘細胞数を測定し，卵丘細胞あたりのcAMPとcGMP量を推定した。【結果】IVM中のSFおよびMF由来DOのcAMPとcGMP量に差は無かった。MF由来のCOCとCCのcAMP量は，IVM培養開始後20時間にSF由来のそれらより有意に高かった（P < 0.05）。また，IVM培養開始後20時間のSF由来CCのcAMP量は，IVM培養開始後10時間のそれより，有意に低下した（P < 0.01）。MF由来のCOCとCCのcGMP量は，IVM培養開始後0および10時間にSF由来のそれらより有意に高かった（P < 0.05）。IVM中のMF由来のCOC中の卵丘細胞数は，SF由来のそれより有意に多かった（P < 0.01）。IVM培養開始後10時間のSF由来卵丘細胞の推定cAMP量は，MF由来のそれより有意に高かった（P < 0.01）。IVM培養開始0時間のMF由来卵丘細胞の推定cGMP量は，SF由来のそれより有意に高かった（P < 0.01）。以上の結果から，IVM時のSFおよびMF由来COC中の卵丘細胞内cAMPとcGMP量の変動パターンは大きく異なっていることが明らかになった。

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ヒト小卵胞および中卵胞由来卵丘細胞‐卵母細胞複合体の体外成熟能

奥平裕一, 高山修, BUI Thi Tra Mi, FERRE Pilar, 本橋秀之, 若井拓哉, 中塚幹也, 中塚幹也, 舟橋弘晃, 舟橋弘晃

日本IVF学会雑誌 18 ( 2 ) 81 - 81 2015.9

Moesin遺伝子発現の可視化による体細胞クローン胚におけるX染色体リプログラミングの評価

若井拓哉, 森園倫成, 渡辺大士, 外丸祐介, 神田暁史, 塩沢誠司, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 60 ( Suppl Japanese Issue ) J142 - j142 2014.8

体細胞クローンマウス精子のDNAメチレーションエラー

河野友宏, 若井拓哉, 水谷英二, 小林久人, 若山清香, 坂下陽彦, 三浦史仁, 伊藤隆司

Journal of Reproduction and Development 60 ( Suppl Japanese Issue ) J75 - j75 2014.8

マウス初期胚における5hmCおよびH3K9me2の挙動とDNA脱メチル化制御機構

坂下陽彦, 中島芽生, 若井拓哉, 小林久人, 井関陽介, 河野友宏

Journal of Mammalian Ova Research 31 ( 2 ) S78 - S78 2014.4

哺乳類卵子における小胞体Ca²⁺オシレーションの制御

若井拓哉, 河野友宏, FISSORE Rafael

Journal of Mammalian Ova Research 31 ( 2 ) S32 2014.4

マウス生殖細胞・初期胚のDNAメチローム解析

小林久人, 坂下陽彦, 若井拓哉, 小池佐, 佐野賢, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 37th 2W6-5(2P-0005) (WEB ONLY) 2014

体細胞クローンマウス精子のDNAメチル化リプログラミング

若井拓哉, 水谷英二, 小林久人, 若山清香, 坂下陽彦, 伊藤隆司, 三浦史仁, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 37th 3W8-6(3P-0172) (WEB ONLY) 2014

マウス卵母細胞におけるATP濃度の可視化と測定

若井拓哉, 今村博臣, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 59 ( Suppl Japanese Issue ) J140 - j140 2013.8

マウス卵子形成過程における5ヒドロキシメチル化シトシンのダイナミクス

坂下陽彦, 小林久人, 井関陽介, 若井拓哉, 外丸祐介, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 59 ( Suppl Japanese Issue ) J77 - j77 2013.8

マウス卵母細胞の成熟過程におけるミトコンドリア動態

若井拓哉, 河野友宏

Journal of Mammalian Ova Research 30 ( 2 ) S87 - S87 2013.4

RNF12 is a Primary Factor for Xist Activation in Mouse Somatic Cloned Embryos

FUKUDA Atsushi, WAKAI Takuya, WATANABE Hiroshi, KONO Tomohiro

59 ( 1 ) A4 2013.2

EIF1A expression in sertoli cell nuclear transfer embryos during preimplantation development

Feng Cao, Takuya Wakai, Hiroshi Watanabe, Tomohiro Kono

Journal of Mammalian Ova Research 30 ( 1 ) 41 - 45 2013

Language：English Publisher：(一社)日本卵子学会

Global transcriptome studies have provided important information advancing our understanding of nuclear reprogramming in somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos. The expression of the Eif1a gene is down-regulated in mouse Sertoli cell nuclear transfer (SeCNT) embryos during the preimplantation stages, however its protein expression level remains unclear. Here we observed the protein expression level of EIF1A by immunofluorescence and western blot analysis during the preimplantation stages in mouse SeCNT embryos. The results reveal that EIF1A protein is constantly expressed in germinal-vesicle and metaphase II oocytes and preimplantation stage embryos. Importantly, the localization and expression level of EIF1A were similar in control in vitro fertilized embryos and SeCNT embryos. Thus, since maternally derived EIF1A persisted throughout preimplantation development, repression of Eif1a is not likely to be involved in the developmental potency of mouse SeCNT embryos. © 2013 Japanese Society of Ova Research.

DOI： 10.1274/jmor.30.41

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マウス卵子形成過程における5‐hydroxymethylcytosineのダイナミクス

坂下陽彦, 小林久人, 井関陽介, 若井拓哉, 外丸祐介, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 36th 2P-0679 (WEB ONLY) 2013

EIF1A expression in sertoli cell nuclear transfer embryos during preimplantation development

Feng Cao, Takuya Wakai, Hiroshi Watanabe, Tomohiro Kono

Journal of Mammalian Ova Research 30 ( 1 ) 41 - 45 2013

Language：English Publisher：JAPANESE SOCIETY OF OVA RESEARCH

DOI： 10.1274/jmor.30.41

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Mitochondrial Localization in Mouse Oocytes

WAKAI Takuya

Journal of mammalian ova research 29 ( 4 ) 155 - 160 2012.10

Language：Japanese Publisher：日本哺乳動物卵子学会

卵母細胞が受精可能な卵子へと発育する過程でミトコンドリアの細胞内局在は大きく変動する。そこで,その局在の詳細を明らかにするために成長および成熟過程の卵母細胞におけるミトコンドリアの生細胞観察を行った。成長期の卵母細胞におけるミトコンドリアは細胞膜直下および核周辺に特に集中しているのに対して,成長を完了した卵母細胞では細胞質全体に拡散して分布しており,同一の組胞周期にある卵母細胞においても成長段階に応じてミトコンドリアの細胞内局在は異なることが分かった。また,成熟過程における卵母細胞のミトコンドリアをGFPでラベルし経時的に追跡したところ,局在のダイナミックな再構築が観察され,さらにそれは微小管の影響を受けていることが分かった。こうしたミトコンドリアの時間･空間的な制御は受精やその後の発生を支持するために必要と考えられる。

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【卵子のエネルギー代謝-ミトコンドリア機能について-】マウス卵母細胞におけるミトコンドリアの細胞内局在

若井拓哉

Journal of Mammalian Ova Research 29 ( 4 ) 155 - 160 2012.10

Language：Japanese Publisher：(一社)日本卵子学会

卵母細胞が受精可能な卵子へと発育する過程でミトコンドリアの細胞内局在は大きく変動する。そこで、その局在の詳細を明らかにするために成長および成熟過程の卵母細胞におけるミトコンドリアの生細胞観察を行った。成長期の卵母細胞におけるミトコンドリアは細胞膜直下および核周辺に特に集中しているのに対して、成長を完了した卵母細胞では細胞質全体に拡散して分布しており、同一の細胞周期にある卵母細胞においても成長段階に応じてミトコンドリアの細胞内局在は異なることが分かった。また、成熟過程における卵母細胞のミトコンドリアをGFPでラベルし経時的に追跡したところ、局在のダイナミックな再構築が観察され、さらにそれは微小管の影響を受けていることが分かった。こうしたミトコンドリアの時間・空間的な制御は受精やその後の発生を支持するために必要と考えられる。(著者抄録)

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Other Link： http://agriknowledge.affrc.go.jp/RN/2010834004

マウス始原生殖細胞におけるDNAメチローム解析

小林久人, 櫻井隆順, 三浦史仁, 今井美咲, 望月研太郎, 柳澤永吉, 坂下陽彦, 若井拓哉, 鈴木穣, 伊藤隆司, 松居靖久, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 58 ( Suppl Japanese Issue ) J102 - j102 2012.8

Language：Japanese Publisher：(一社)日本繁殖生物学会

【目的】DNAメチル化は哺乳類生殖細胞分化の過程でダイナミックに変化するエピゲノム修飾の一つであり、各配偶子におけるゲノムインプリント確立・外来性リピート配列の抑制などの重要な役割を担う。また、生殖細胞の最終形態である精子・卵子ではまったく異なるメチル化パターンを示す。しかし、そのようなメチル化の性差が生じる各領域のメチル化・脱メチル化のターゲティング機構は明らかにされていない。我々は雌雄始原生殖細胞の包括的なDNAメチル化マップ（DNAメチローム）を作製し、生殖細胞形成過程におけるDNAメチロームの性差を詳細にプロファイリングした。【方法】胎齢10.5-16.5日齢Oct4-GFPマウス胚からFACS法によるソーティングによりマウス始原生殖細胞を雌雄それぞれ2000-4000細胞回収した。微量サンプルからの調整が可能となるPost-Bisulfite Adaptor Tagging（PBAT）法により、DNAメチローム解析用のDNAライブラリーを作製し、HiSeq2000（Illumina）を用いて高速シークエンスを行った。【結果】解析した胎齢を通して雌雄生殖細胞間の全体的なCpGメチル化の性差がみられた。胎齢10.5日から13.5日にかけて、X染色体上のCpGアイランドならびにインプリント制御領域（ICR）のメチル化の消去とともにゲノムワイドな脱メチル化がみられる一方、CpG-richな一部のレトロトランスポゾンにおいて高度なメチル化が残っていることが明らかとなった。また、16.5日齢において父方ICRのメチル化の上昇がみられるが、母方ICRの一部も、雌雄始原生殖細胞間のメチル化差異領域として同定することができた。本発表では生殖細胞におけるDNAメチル化の性差についてより詳細に解説し、機能的性差との関わりについて議論する。

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