Faculty Profiles - WAKAI Takuya

MISC - WAKAI Takuya

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哺乳動物初期胚への光による時空間特異的なRNA導入法

大槻高史, 井川優風, 若井拓哉, 舟橋弘晃, 渡邉和則

日本光医学・光生物学会 45th 2023

Spatiotemporally photocontrolled RNA transfection in early mammalian embryos

井川優風, 若井拓哉, 舟橋弘晃, 渡邉和則, 大槻高史

日本バイオマテリアル学会大会予稿集(Web) 44th 2022

Trim‐Away法を用いたマウス卵母細胞におけるDrp1の機能解析

月向はるな, 野村瑠莉, 舟橋弘晃, 若井拓哉

Journal of Mammalian Ova Research 36 ( 1 ) S44 - S44 2019.4

体外成熟時のブタ卵母細胞のオートファジー能は由来する小中卵胞で異なる

小野千由貴, 若井拓哉, 舟橋弘晃

Journal of Mammalian Ova Research 36 ( 1 ) S56 - S56 2019.4

着床前胚発生におけるミトコンドリア分裂因子Drp1の機能解析

野村瑠莉, 月向はるな, 舟橋弘晃, 若井拓哉

Journal of Mammalian Ova Research 36 ( 1 ) S43 - S43 2019.4

マウス卵母細胞におけるTrim-Away法を用いたリン酸化タンパク質の分解

月向はるな, 野村瑠莉, 舟橋弘晃, 若井拓哉

Journal of Reproduction and Development 65 ( Suppl Japanese Issue ) 2019

光応答的に働く卵活性化因子の開発

大本和正, 若井拓哉, 舟橋弘晃, 渡邉和則, 大槻高史

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 42nd 2019

ミトコンドリア分裂因子Drp1の阻害による着床前マウス胚の発生停止

野村瑠莉, 月向はるな, 舟橋弘晃, 若井拓哉

Journal of Reproduction and Development 65 ( Suppl Japanese Issue ) 2019

Dendra2蛍光タンパク質を用いた初期胚ミトコンドリアの細胞間分配の解析

若井拓哉, 野村瑠璃

Journal of Reproduction and Development 64 ( Suppl Japanese Issue ) j105 - j105 2018.9

Language：Japanese Publisher：(一社)日本繁殖生物学会

【目的】細胞分裂時，ミトコンドリアは二つに娘細胞に大まかに均等分配される。最近，哺乳動物幹細胞の細胞分裂時に，新しくできたミトコンドリアが幹細胞側へ積極的に分配されることが報告され，ミトコンドリアの非対称的な分配が幹細胞性の維持や細胞分化に重要であることが示唆されている。本研究では，初期胚の細胞間でミトコンドリアの分配に非対称性が存在するか検証するために，任意の卵割段階の特定の細胞においてミトコンドリアを標識し，胚盤胞期までの発生過程でそのミトコンドリアの追跡を試みた。【方法】ミトコンドリアターゲットシグナルを付加したDendra2（Dendra2-mt）をコードするcDNAからIn vitro転写によりRNAを合成し，前核期のマウス受精卵の細胞質にマイクロインジェクションを行った。ミトコンドリアでの緑色蛍光を確認後，4細胞期の単一の割球に405 nmダイオードレーザーの励起光を照射し，緑色から赤色への蛍光変換を誘起した。体外胚培養を継続し，桑実胚期および胚盤胞期に赤色蛍光を示す細胞の分布を観察した。【結果および考察】Dendra2-mtを発現させた初期胚の単一割球へ励起光を照射し，特定の細胞においてミトコンドリアを標識することが可能であることが示された。照射による発生能の低下は見られなかったが，幾つかの胚では胚全体が赤色蛍光を示すものが存在したことから，励起条件は更なる検討が必要である。4細胞期で標識したミトコンドリアを追跡した結果，桑実胚期では31％，胚盤胞期では36％の細胞に寄与することが分かった。また，胚盤胞期の内部細胞塊と栄養外胚葉で明確な寄与の差は認められなかった。

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初期胚におけるミトコンドリア分裂因子Drp1の役割

野村瑠莉, 若井拓哉, 舟橋弘晃

日本卵子学会誌 3 ( 1 ) S58 - S58 2018.4

ブタ顕微授精卵での精子頭部膨化・雄性前核形成不全の解析

林雄平, 若井拓哉, 舟橋弘晃

日本卵子学会誌 3 ( 1 ) S45 - S45 2018.4

受精後のDNAメチル化リプログラミングにおける種間差異

澤田友季乃, 舟橋弘晃, 若井拓哉

岡山実験動物研究会報 ( 34 ) 76‐77 - 77 2018.4

Epidermal Growth Factorはヒト初期卵胞の体外発育を促進する

高山修, 奥平裕一, 若井拓哉, 中塚幹也, 中塚幹也, 舟橋弘晃, 舟橋弘晃

日本卵子学会誌 2 ( 1 ) S58 - S58 2017.4

ウシ精巣からの精原幹細胞採取の試み

永原知樹, 若井拓哉, 舟橋弘晃

岡山実験動物研究会報 ( 33 ) 50 - 50 2017.4

ブタ卵母細胞中のミトコンドリア細胞内分布の変化

葛原大貴, 若井拓哉, 舟橋弘晃

岡山実験動物研究会報 ( 33 ) 50‐51 - 51 2017.4

異なる還元剤による精子前処理がICSIブタ卵での雄性前核形成に及ぼす影響

林雄平, 若井拓哉, 舟橋弘晃

日本畜産学会大会講演要旨 122nd 156 - 156 2017.3

Mitochondrial dynamics in mammalian oocytes

若井拓哉

岡山大学農学部学術報告(Web) 106 39‐42 (WEB ONLY) 2017.2

Mitochondrial dynamics in mammalian oocytes

若井拓哉

岡山大学農学部学術報告 106 ( 106 ) 39 - 42 2017.2

Language：Japanese Publisher：岡山大学農学部

Subcellular distribution of mitochondria are reorganized during development of the oocyte into afertilizable egg. In growing oocytes, mitochondria are heterogeneously distributed in the cytoplasm, whereas they diffuse throughout the cytoplasm in fully-grown oocytes. GFP-labeled mitochondria demonstrate that oocyte maturation involves dynamic redistribution of the mitochondria, whose process is associated with microtubule organization. These spatio-temporal regulations of mitochondria in oocytes may be an important process in the preparation for fertilization and subsequent embryonic development.

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減数分裂と卵割におけるミトコンドリアの細胞間分配

若井拓哉

日本卵子学会誌 1 ( 1 ) S5 2016.4

マウス卵子におけるミトコンドリア

若井拓哉

岡山実験動物研究会報 ( 32 ) 56 - 57 2016.4

精子・卵子研究から生殖補助医療への新たな展開減数分裂と卵割におけるミトコンドリアの細胞間分配

若井拓哉

日本卵子学会誌 1 ( 1 ) S5 - S5 2016.4

マウス卵子におけるミトコンドリアの特性

若井拓哉

岡山実験動物研究会報 ( 32 ) 9‐11 - 11 2016.4

IVM中のブタ小中卵胞由来COC,裸化卵母細胞,卵丘細胞内のcAMPおよびcGMP量

奥平裕一, 若井拓哉, 舟橋弘晃

Journal of Reproduction and Development 61 ( Suppl Japanese Issue ) J91 - j91 2015.9

Language：Japanese Publisher：(一社)日本繁殖生物学会

【目的】体外成熟（IVM）中の細胞内cAMPとcGMP量の劇的な変化は，卵母細胞の減数分裂再開に大きく関与している。本研究は，卵丘細胞-卵母細胞複合体（COC），裸化卵母細胞（DO）および卵丘細胞塊（CC）内のcAMPとcGMP量のIVM中の変動を，小卵胞（SF：直径1–3 mm）および中卵胞（MF：3–6 mm）間で比較した。【方法】SFまたはMFからCOCsを採取し，24時間IVMを行った（eCG，hCG，dibutyryl cAMP添加mPOM中で20時間培養，その後4時間はそれらを不含のmPOM中で培養）。IVM培養開始0，10，20，24時間に，COCsを回収し，COC，DO，CCそれぞれのcAMPとcGMP量をELISA法で測定した。また，IVM培養開始0, 10, 20時間に，COCあたりの卵丘細胞数を測定し，卵丘細胞あたりのcAMPとcGMP量を推定した。【結果】IVM中のSFおよびMF由来DOのcAMPとcGMP量に差は無かった。MF由来のCOCとCCのcAMP量は，IVM培養開始後20時間にSF由来のそれらより有意に高かった（P < 0.05）。また，IVM培養開始後20時間のSF由来CCのcAMP量は，IVM培養開始後10時間のそれより，有意に低下した（P < 0.01）。MF由来のCOCとCCのcGMP量は，IVM培養開始後0および10時間にSF由来のそれらより有意に高かった（P < 0.05）。IVM中のMF由来のCOC中の卵丘細胞数は，SF由来のそれより有意に多かった（P < 0.01）。IVM培養開始後10時間のSF由来卵丘細胞の推定cAMP量は，MF由来のそれより有意に高かった（P < 0.01）。IVM培養開始0時間のMF由来卵丘細胞の推定cGMP量は，SF由来のそれより有意に高かった（P < 0.01）。以上の結果から，IVM時のSFおよびMF由来COC中の卵丘細胞内cAMPとcGMP量の変動パターンは大きく異なっていることが明らかになった。

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ヒト小卵胞および中卵胞由来卵丘細胞‐卵母細胞複合体の体外成熟能

奥平裕一, 高山修, BUI Thi Tra Mi, FERRE Pilar, 本橋秀之, 若井拓哉, 中塚幹也, 中塚幹也, 舟橋弘晃, 舟橋弘晃

日本IVF学会雑誌 18 ( 2 ) 81 - 81 2015.9

Moesin遺伝子発現の可視化による体細胞クローン胚におけるX染色体リプログラミングの評価

若井拓哉, 森園倫成, 渡辺大士, 外丸祐介, 神田暁史, 塩沢誠司, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 60 ( Suppl Japanese Issue ) J142 - j142 2014.8

体細胞クローンマウス精子のDNAメチレーションエラー

河野友宏, 若井拓哉, 水谷英二, 小林久人, 若山清香, 坂下陽彦, 三浦史仁, 伊藤隆司

Journal of Reproduction and Development 60 ( Suppl Japanese Issue ) J75 - j75 2014.8

マウス初期胚における5hmCおよびH3K9me2の挙動とDNA脱メチル化制御機構

坂下陽彦, 中島芽生, 若井拓哉, 小林久人, 井関陽介, 河野友宏

Journal of Mammalian Ova Research 31 ( 2 ) S78 - S78 2014.4

哺乳類卵子における小胞体Ca²⁺オシレーションの制御

若井拓哉, 河野友宏, FISSORE Rafael

Journal of Mammalian Ova Research 31 ( 2 ) S32 2014.4

マウス生殖細胞・初期胚のDNAメチローム解析

小林久人, 坂下陽彦, 若井拓哉, 小池佐, 佐野賢, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 37th 2W6-5(2P-0005) (WEB ONLY) 2014

体細胞クローンマウス精子のDNAメチル化リプログラミング

若井拓哉, 水谷英二, 小林久人, 若山清香, 坂下陽彦, 伊藤隆司, 三浦史仁, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 37th 3W8-6(3P-0172) (WEB ONLY) 2014

マウス卵母細胞におけるATP濃度の可視化と測定

若井拓哉, 今村博臣, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 59 ( Suppl Japanese Issue ) J140 - j140 2013.8

マウス卵子形成過程における5ヒドロキシメチル化シトシンのダイナミクス

坂下陽彦, 小林久人, 井関陽介, 若井拓哉, 外丸祐介, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 59 ( Suppl Japanese Issue ) J77 - j77 2013.8

マウス卵母細胞の成熟過程におけるミトコンドリア動態

若井拓哉, 河野友宏

Journal of Mammalian Ova Research 30 ( 2 ) S87 - S87 2013.4

RNF12 is a Primary Factor for Xist Activation in Mouse Somatic Cloned Embryos

FUKUDA Atsushi, WAKAI Takuya, WATANABE Hiroshi, KONO Tomohiro

59 ( 1 ) A4 2013.2

EIF1A expression in sertoli cell nuclear transfer embryos during preimplantation development

Feng Cao, Takuya Wakai, Hiroshi Watanabe, Tomohiro Kono

Journal of Mammalian Ova Research 30 ( 1 ) 41 - 45 2013

Language：English Publisher：(一社)日本卵子学会

Global transcriptome studies have provided important information advancing our understanding of nuclear reprogramming in somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos. The expression of the Eif1a gene is down-regulated in mouse Sertoli cell nuclear transfer (SeCNT) embryos during the preimplantation stages, however its protein expression level remains unclear. Here we observed the protein expression level of EIF1A by immunofluorescence and western blot analysis during the preimplantation stages in mouse SeCNT embryos. The results reveal that EIF1A protein is constantly expressed in germinal-vesicle and metaphase II oocytes and preimplantation stage embryos. Importantly, the localization and expression level of EIF1A were similar in control in vitro fertilized embryos and SeCNT embryos. Thus, since maternally derived EIF1A persisted throughout preimplantation development, repression of Eif1a is not likely to be involved in the developmental potency of mouse SeCNT embryos. © 2013 Japanese Society of Ova Research.

DOI： 10.1274/jmor.30.41

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マウス卵子形成過程における5‐hydroxymethylcytosineのダイナミクス

坂下陽彦, 小林久人, 井関陽介, 若井拓哉, 外丸祐介, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 36th 2P-0679 (WEB ONLY) 2013

EIF1A expression in sertoli cell nuclear transfer embryos during preimplantation development

Feng Cao, Takuya Wakai, Hiroshi Watanabe, Tomohiro Kono

Journal of Mammalian Ova Research 30 ( 1 ) 41 - 45 2013

Language：English Publisher：JAPANESE SOCIETY OF OVA RESEARCH

DOI： 10.1274/jmor.30.41

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Mitochondrial Localization in Mouse Oocytes

WAKAI Takuya

Journal of mammalian ova research 29 ( 4 ) 155 - 160 2012.10

Language：Japanese Publisher：日本哺乳動物卵子学会

卵母細胞が受精可能な卵子へと発育する過程でミトコンドリアの細胞内局在は大きく変動する。そこで,その局在の詳細を明らかにするために成長および成熟過程の卵母細胞におけるミトコンドリアの生細胞観察を行った。成長期の卵母細胞におけるミトコンドリアは細胞膜直下および核周辺に特に集中しているのに対して,成長を完了した卵母細胞では細胞質全体に拡散して分布しており,同一の組胞周期にある卵母細胞においても成長段階に応じてミトコンドリアの細胞内局在は異なることが分かった。また,成熟過程における卵母細胞のミトコンドリアをGFPでラベルし経時的に追跡したところ,局在のダイナミックな再構築が観察され,さらにそれは微小管の影響を受けていることが分かった。こうしたミトコンドリアの時間･空間的な制御は受精やその後の発生を支持するために必要と考えられる。

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【卵子のエネルギー代謝-ミトコンドリア機能について-】マウス卵母細胞におけるミトコンドリアの細胞内局在

若井拓哉

Journal of Mammalian Ova Research 29 ( 4 ) 155 - 160 2012.10

Language：Japanese Publisher：(一社)日本卵子学会

卵母細胞が受精可能な卵子へと発育する過程でミトコンドリアの細胞内局在は大きく変動する。そこで、その局在の詳細を明らかにするために成長および成熟過程の卵母細胞におけるミトコンドリアの生細胞観察を行った。成長期の卵母細胞におけるミトコンドリアは細胞膜直下および核周辺に特に集中しているのに対して、成長を完了した卵母細胞では細胞質全体に拡散して分布しており、同一の細胞周期にある卵母細胞においても成長段階に応じてミトコンドリアの細胞内局在は異なることが分かった。また、成熟過程における卵母細胞のミトコンドリアをGFPでラベルし経時的に追跡したところ、局在のダイナミックな再構築が観察され、さらにそれは微小管の影響を受けていることが分かった。こうしたミトコンドリアの時間・空間的な制御は受精やその後の発生を支持するために必要と考えられる。(著者抄録)

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Other Link： http://agriknowledge.affrc.go.jp/RN/2010834004

マウス始原生殖細胞におけるDNAメチローム解析

小林久人, 櫻井隆順, 三浦史仁, 今井美咲, 望月研太郎, 柳澤永吉, 坂下陽彦, 若井拓哉, 鈴木穣, 伊藤隆司, 松居靖久, 河野友宏

Journal of Reproduction and Development 58 ( Suppl Japanese Issue ) J102 - j102 2012.8

Language：Japanese Publisher：(一社)日本繁殖生物学会

【目的】DNAメチル化は哺乳類生殖細胞分化の過程でダイナミックに変化するエピゲノム修飾の一つであり、各配偶子におけるゲノムインプリント確立・外来性リピート配列の抑制などの重要な役割を担う。また、生殖細胞の最終形態である精子・卵子ではまったく異なるメチル化パターンを示す。しかし、そのようなメチル化の性差が生じる各領域のメチル化・脱メチル化のターゲティング機構は明らかにされていない。我々は雌雄始原生殖細胞の包括的なDNAメチル化マップ（DNAメチローム）を作製し、生殖細胞形成過程におけるDNAメチロームの性差を詳細にプロファイリングした。【方法】胎齢10.5-16.5日齢Oct4-GFPマウス胚からFACS法によるソーティングによりマウス始原生殖細胞を雌雄それぞれ2000-4000細胞回収した。微量サンプルからの調整が可能となるPost-Bisulfite Adaptor Tagging（PBAT）法により、DNAメチローム解析用のDNAライブラリーを作製し、HiSeq2000（Illumina）を用いて高速シークエンスを行った。【結果】解析した胎齢を通して雌雄生殖細胞間の全体的なCpGメチル化の性差がみられた。胎齢10.5日から13.5日にかけて、X染色体上のCpGアイランドならびにインプリント制御領域（ICR）のメチル化の消去とともにゲノムワイドな脱メチル化がみられる一方、CpG-richな一部のレトロトランスポゾンにおいて高度なメチル化が残っていることが明らかとなった。また、16.5日齢において父方ICRのメチル化の上昇がみられるが、母方ICRの一部も、雌雄始原生殖細胞間のメチル化差異領域として同定することができた。本発表では生殖細胞におけるDNAメチル化の性差についてより詳細に解説し、機能的性差との関わりについて議論する。

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Maternal RNF12 inhibits developmental reprogramming of somatic cell in mice

FUKUDA Atsushi, WAKAI Takuya, WATANABE Hiroshi, KONO Tomohiro

The Journal of Reproduction and Development Supplement 105 ( 0 ) j92 - j92 2012.8

Language：Japanese Publisher：日本繁殖生物学会

【目的】マウス体細胞クローン胚は胚盤胞期以降急激に発生能が低下する。これまでに，単一クローン胚盤胞からのトランスクリプトーム解析から，Xist遺伝子の発現異常によるX染色体不活性化（XCI）が全能性獲得の障害となることが明らかとなった。体細胞核のリプログラミングは核内局在性の母性因子が重要な役割を果たすことが知られている。そこで，本研究では量依存的Xist活性化因子である母性RNF12に着目し，体細胞由来のXist活性化及び，全能性へのリプログラミングに及ぼす影響を検証した。【方法】核移植のレシピエント卵子にはB6D2F1系統マウス（8-12週齢），ドナー細胞にはB6CBF1系統（新生仔）のセルトリ細胞をそれぞれ用いた。母性RNF12の発現抑制にはsiRNAを用いたノックダウン（KD）法を用いた。母性RNF12抑制卵子より，セルトリ細胞クローン胚（mRnf12KD SeCNTs）を作出した。KSOM培地で胚盤胞期まで体外培養し，定量PCR法を用いた遺伝子発現解析を行った。免疫染色解析（H3K27me3)でXCIの状態を評価した。クローン胚の一部は子宮へ移植し，体内発生能を調べた。【結果】mRnf12KD SeCNTs胚盤胞期におけるXist発現量は，コントロール区の6倍以上発現抑制された（P<0.01）。さらに，胚盤胞期におけるH3K27me3陽性細胞の割合も，mRnf12KD SeCNTsでは有意に減少した（37.2％vs7.9%）。また，母性Rnf12が60％以上存在する卵子を用いた場合，Xist発現量に有意な減少はみられなかった。移植試験の結果，コントロール区では2.2％（2/93）が至ったのに対し，mRnf12KD SeCNTsでは8.7％（9/103）が産仔に至り，有意に発生能が向上した（P<0.05）。以上の結果より，SeCNTsにおけるドナー細胞核のXist活性化は母性RNF12依存的であり，母性RNF12は全能性へのリプログラミングを阻害する因子であることが明らかとなった。

DOI： 10.14882/jrds.105.0_5

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マウス卵子の減数分裂におけるH3K27me3の伝達機構

若井拓哉, 河野友宏

Journal of Mammalian Ova Research 29 ( 2 ) S55 - S55 2012.4

マウス卵母細胞の成熟過程におけるミトコンドリアの動態

若井拓哉, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 35th 4P-0399 (WEB ONLY) 2012

Mitochondrial localization in mouse oocytes

Takuya Wakai

Journal of Mammalian Ova Research 29 ( 4 ) 155 - 160 2012

Language：Japanese

Intracellular distribution of mitochondria varies during development of the oocyte into a fertilizable egg. Here we demonstrate a change in the distribution of mitochondria during oocyte growth and maturation in living mouse oocytes. In growing oocytes, mitochondria concentrated into subcortical and perinuclear areas, whereas it diffusely distributed throughout the cytoplasm in fully-grown oocytes, indicating the variation of mitochondrial distribution in the same G2/M cell-cycle stages. GFP-labeled mitochondria reveal that oocyte maturation involves dynamic reorganization of the mitochondria, and whose process is associated with microtubule organization. These spatio-temporal regulations of mitochondria in oocytes may be important process in the preparation of fertilization and subsequent embryonic development.

DOI： 10.1274/jmor.29.155

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マウス始原生殖細胞におけるDNAメチローム解析

小林久人, 櫻井隆順, 三浦史仁, 今井美咲, 望月研太郎, 柳澤永吉, 坂下陽彦, 若井拓哉, 鈴木穣, 伊藤隆司, 松居靖久, 河野友宏

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web) 35th 1W1I-5 (WEB ONLY) 2012

Mitochondrial Localization in Mouse Oocytes

Wakai Takuya

Journal of Mammalian Ova Research 29 ( 4 ) 155 - 160 2012

Language：English Publisher：JAPANESE SOCIETY OF OVA RESEARCH

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University of Massachusetts Amherst

WAKAI Takuya, Fissore Rafael

The Journal of Reproduction and Development Supplement 104 ( 0 ) 215 - 215 2011.8

Language：Japanese Publisher：日本繁殖生物学会

Ca2+ is the universal signal for the egg activation and initiation of embryo development in all species studied to date. The sarcoendoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA), which is located in the endoplasmic reticulum (ER) membrane, imports Ca2+ into the lumen of the ER. Despite the pivotal role of SERCA in Ca2+ homeostasis in the cell, its function has not been investigated in mammalian oocytes. Herein we demonstrate that SERCA2b plays crucial roles in an increase in the ER Ca2+ stores during oocyte maturation and subsequent Ca2+ oscillations after egg activation. The inhibition of SERCA by cyclopiazonic acid (CPA), a specific inhibitor of SERCA, prevented the accumulation of Ca2+ into ER during oocyte maturation. Expression of GFP-tagged SERCA2b isoform showed that SERCA2b is redistributed during oocyte maturation to form an organized reticular network in mature oocytes. The overexpression of SERCA2b increased the oocyte's ER Ca2+ sequestering ability. Furthermore, the direct ER Ca2+ measurement by a FRET-based Ca2+ sensor reveals that SERCA is required for Ca2+ oscillations via the rifiling of ER Ca2+. Collectively, our results suggest that the increase in ER Ca2+ stores via SERCA2b may underpin the robust Ca2+ release from the ER at fertilization. In addition, the pump's activity makes possible and the refilling of the transiently depleted Ca2+ stores to maintain the persistent Ca2+ oscillations required for the initiation of embryo development.

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Birth of somatic cell nuclear transfer(SCNT)-cloned miniature piglet following co-transfer parthenogenetic embryos

Sugimura,S, Yamanaka,K, Wakai,T, Kawahara,M, Tanaka,H, Kobayashi,J, Kobayashi,E, Sato,E

Tohoku J.Agr.Res. 59 ( 3,4 ) 51 - 61 2009

Vitrification of immature oocytes in domestic and endangered wild animals

佐藤英明, 若井拓哉, 星野由美

岩谷直治記念財団研究報告書 30 1 - 2 2007.8

初期胚発生におけるミトコンドリアの機能解析

杉村智史, 横尾正樹, 山中賢一, 青野展也, 若井拓哉, 佐々田比呂志, 阿部宏之, 佐藤英明

日本生殖医学会雑誌 52 ( 1/2 ) 62 - 62 2007.4

医療目的の遺伝子改変家畜開発の到達点と今後

若井拓哉, 佐藤英明

畜産の研究 61 ( 4 ) 437 - 441 2007.4

ミニブタ体細胞クローン個体作出成功に関わる要因解析

杉村智史, 山中賢一, 若井拓哉, 佐藤英明

日本胚移植学雑誌 29 ( 1 ) 10 - 13 2007.1

Recent progress and perspectives of the research in developming transgenic animals

Wakai,T, Sato,E

Sustainable Livestock Production and Human Welfare 61 ( 4 ) 437 - 441 2007

Evaluation of mitochondrial function in single cloned miniature pig embryos by measuring oxygen consumption

S. Sugimura, M. Yokoo, K. -I. Yamanaka, T. Wakai, H. Abe, T. Shoji, H. Sasada, J. Kobayashi, H. Abe, E. Sato

REPRODUCTION FERTILITY AND DEVELOPMENT 19 ( 1 ) 161 - 161 2007

Recent advances in understanding the morphological changes in the meiotic maturation in mammalian cumulus-oocyte complexe

Hoshino,Y, Yokoo,M, Wakai,T, Tomioka,I, Sato,E

Morphology 2 ( 1 ) 8 - 22 2007

Morphological aspects of porcine embryos resonstructed by somatic cell nuclear transfer

Wakai,T, Kawahara,M, Yamanaka,K, Hoshino,Y, Tomioka,I, Sugimura,S, Sugawara,A, Sato,E

Morphology 2 ( 1 ) 23 - 27 2007

単為発生卵との共移植による体細胞クローンミニブタの作出

山中賢一, 杉村智史, 若井拓哉, 庄司孟央, 佐々田比呂志, 田中穂積, 小林英司, 佐藤英明

日本畜産学会大会講演要旨 106th 86 - 86 2006.3

ミニブタ体細胞クローン個体作出成功に関わる要因解析

杉村智史, 山中賢一, 若井拓哉, 佐藤英明

日本胚移植学雑誌 29 ( 1 ) 10 - 13 2006.1

Utility of parthenogenetic embryos as a co-transfer embryo for so nuclear transferred embryos in production of cloned miniature pigs

Sugimura,S, Yamanaka,K, Wakai,T, Shouji,T, Sasada,H, Tanaka,H, Kobayashi,J, Kobayashi,E, Sato,E

In Challenge of Animal Industry for the Wellbeing of Mankind, XIIth AAAP Animal Science Congress 1 - 3 2006

Effect of culture media on in vitro development of SCNT-cloned miniature pig embryos

Yamanaka,K, Sugimura,S, Wakai,T, Shoji,T, Kobayashi,J, Sasada,H, Sato,E

In Challenge of Animal Industry for the Wellbeing of Mankind, XIIth AAAP Animal Science Congress 2006 9 - 11 2006

ミャンマー連邦の畜産行政

田中穂積, 若井拓哉, 金川弘司

北海道獣医師会雑誌 49 ( 9 ) 366 - 370 2005.9

自治医科大学におけるブタを用いた医学教育と研究

田中穂積, 和久井亨, 若井拓哉, 吉野浩之, 河野正樹, 岡田真樹, 筒井真理子, 鳥取潤一, 小林英司

日本獣医学会学術集会講演要旨集 140th 224 - 224 2005.8

レシピエント卵子の体外成熟培養時間がミニブタ体細胞核の再構築およびクローンはいの発生に及ぼす影響

杉村智史, 若井拓哉, 山中賢一, 庄司孟央, 佐々田比呂志, 佐藤英明

Journal of Reproduction and Development 51 ( Supplement ) J104 2005.8

アクチンフィラメントを指標としたミニブタ再構築はい活性化方法の最適化

山中賢一, 杉村智史, 庄司孟央, 若井拓哉, 佐々田比呂志, 佐藤英明

日本畜産学会大会講演要旨 105th 12 2005.8

低単位の性腺刺激ホルモンによるミニブタの発情誘起

若井拓哉, 田中穂積, 山中賢一, 杉村智志, 筒井真理子, 鳥取潤一, 佐々田比呂志, 佐藤英明, 小林英司

Journal of Reproduction and Development 51 ( Supplement ) J135 - j135 2005.8

Language：Japanese Publisher：(一社)日本繁殖生物学会

【目的】トランスジェニックブタや体細胞クローンブタを作出するためには、ドナーブタの過剰排卵処置やレシピエントブタの発情周期の同期化などの発情周期を確実に制御することが重要である。しかしながら、ミニブタでは発情誘起に関する報告は少ない。そこで本研究ではミニブタにおける発情誘起方法を確立するために、低単位のPMSGとhCGの併用投与による発情誘起を試みた。【方法】（実験1）供試ブタは未経産のクラウン系ミニブタ（8ヵ月齢）、メキシカンへアレス4頭（5～10ヵ月齢）、中国系小型ブタ2頭（9ヵ月齢）および三元交雑ミニブタ4頭（4.5～9.5ヵ月齢）を用いた。それぞれPMSG 300 IU＋hCG 150 IUを筋肉内注射し発情の発現を調べた。PMSGとhCG投与後 72時間にhCG 150 IUを筋肉内注射し、その後40から48時間に卵巣の状態を観察した。（実験2）三元交雑ミニブタ8頭（6～9.5ヵ月）を用い、処理区AではPMSG 300 IU＋hCG 150 IU、処理区BではPMSG 200 IU＋hCG 100 IUを投与し72時間後にそれぞれhCG 150 ,750 IUを投与した。hCG投与後43～45時間に卵管を還流し排卵数を調べた。またクラウン系ミニブタ6頭（10.5～14.5ヵ月）を用い、処理区AおよびBで誘起された発情期に雄豚と交配後、発情周期の回帰と超音波診断を指標として妊娠の成立を判定した。【結果】（実験1）正常な発情周期を持った個体でホルモン投与後3～4日にクラウン系の75%、その他の系統では100%が発情を示した。一方、性成熟前の個体では発情の発現が認められなかった。また、排卵点の数は系統間で差が見られなかった。（実験2）処理区Aでは回収した卵のうち77%が成熟卵子であったが、処理区Bでは回収した卵の全てが成熟卵子であった。また、誘起された発情期に交配したところ、処理区Aでは4頭中2頭が妊娠し、処理区Bでは1頭中1頭が妊娠した。

DOI： 10.14882/jrds.98.0.163.0

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Effect of duration for in vitro maturation of recipient oocytes on nuclear remodeling and embryo development after SCNT in miniature pigs.

Sugimura Satoshi, Wakai Takuya, Yamanaka Kenichi, Syoji Takehisa, Sasada Hiroshi, Sato Eimei

The Journal of Reproduction and Development Supplement 98 ( 0 ) 100 - 100 2005.8

Publisher：日本繁殖生物学会

【目的】我々は，レシピエント卵子の体外成熟培養時間および顕微操作とそれに伴う時間の経過がレシピエント卵子のMPF活性レベルを低下させる一因であることを報告した(本学会第95回大会)。そこで今回は，MPF活性レベルに左右されると考えられるドナー細胞核の再構築およびクローン胚の発生に及ぼすレシピエント卵子の体外成熟培養時間の影響を調べた。【方法】食肉処理場由来のブタ卵巣から未成熟卵母細胞を採取し，体外成熟培養した。成熟培養後36，40，44および52時間に第一極体放出が確認できた成熟卵子をレシピエント卵子とした。ドナー細胞にはミニブタ胎子線維芽細胞を用いた。ドナー細胞を卵細胞質内に注入し，注入後3時間にイオノマイシン 20分間，120v/mm 60&micro;secの直流パルス5秒間隔2回，およびサイトカラシンD添加シクロヘキシミド5時間の条件で活性化しクローン胚を作製した。ドナー細胞注入後3時間で早期染色体凝集(PCC)率，免疫細胞化学的手法による紡錘体と染色体の形成様式および体外発生培養後6時間で前核様核形成率を調べた。さらに，発生培養後2日で卵割率，7日で胚盤胞期胚発生率を調べた。【結果】PCC率は成熟培養時間の経過に伴い低下する傾向を示した。培養36および44時間では多くのドナー細胞核が正常な紡錘体を形成したのに対し，培養44および52時間では異常な紡錘体を形成したものが多く観察された。前核様核形成率はすべての培養時間で有意な差は認められなかったが，培養36および40時間で2前核様核を形成したクローン胚が多かった。顕微操作後もMPF活性レベルが高度に維持されていた成熟培養36および40時間では胚盤胞期胚発生率が他の培養区に比べ高い傾向であった。以上の結果，ミニブタ体細胞クローン胚ではレシピエント卵子の高いMPF活性レベルがPCC形成に必要であり，その後のドナー細胞核の正常な核の再構築を誘導することが示唆された。

CiNii Article

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アクチンフィラメントを指標としたミニブタ再構築胚活性化方法の最適化

山中賢一, 杉村智史, 庄司孟央, 若井拓哉, 佐々田比呂志, 佐藤英明

日本畜産学会大会講演要旨集 105回 12 - 12 2005.8

ミャンマー連邦の畜産

田中穂積, 若井拓哉, 金川弘司

北海道獣医師会雑誌 49 ( 7 ) 13 - 17 2005.7

ブタ核移植技術の現状と応用

若井拓哉, 佐藤英明, 田中穂積, 小林英司

Organ Biology 11 ( 2 ) 169 - 169 2004.5

実験動物としての豚の現況

田中穂積, 若井拓哉, 吉野浩之, 椎貝正太, 小林英司

Organ Biology 11 ( 1 ) 33 - 40 2004.4

カフェイン添加によるMPF活性の低下抑制およびドナー細胞の条件がミニブタ再構築はいの発生に及ぼす影響

山中賢一, 川原学, 若井拓哉, 杉村智史, 佐々田比呂志, 佐藤英明

日本畜産学会大会講演要旨 103rd 104 2004.3

カフェイン添加によるMPF活性の低下抑制およびドナー細胞の条件がミニブタ再構築胚の発生に及ぼす影響

山中賢一, 川原学, 若井拓哉, 杉村智史, 佐々田比呂志, 佐藤英明

日本畜産学会大会講演要旨集 103回 104 - 104 2004.3

声の広場家畜豚の実験使用によるE型肝炎ウイルス対策

田中穂積, 吉野浩之, 若井拓哉, 袴田陽二, 椎貝正太, 長尾慶和, 岡本宏明, 小林英司

Organ Biology 10 ( 4 ) 339 - 347 2003.12

譲渡犬の実験使用中止の動向とその対応に関するアンケート調査

椎貝正太, 長尾慶和, 吉野浩之, 若井拓哉, 袴田陽二, 田中穂積, 小林英司

Organ Biology 10 ( 4 ) 321 - 329 2003.12

Language：Japanese Publisher：(一社)日本臓器保存生物医学会

2002年度における大学医学部附属実験施設を対象として,中型動物を用いた実験の実態について,特に譲渡犬と家畜ブタの使用状況等に関する調査を行った.無効回答1件を含む94件から回答が得られ,回収率は82%であった.イヌは全実験施設のうち83%で使用され,現在も譲渡犬を使用している施設は17%であった.ブタは56%で使用され,そのうち家畜ブタを使用している施設は48%で,ブタ使用施設の約8割が家畜ブタを使用していた.平均使用頭数は,譲渡犬の平均78.8頭に対し,家畜ブタは平均31.6頭と少なかった.家畜ブタの年間使用頭数は,1〜10頭の施設が50%を占めており,利用数の少ない施設が大半であった.家畜ブタに対する検疫で,何らかの検疫を実施していると回答したのは51%であった

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中国海南省の在来豚の現況と世界の実験用豚の趨勢

田中穂積, 王希龍, 若井拓哉, 小林英司, 金川弘司

北海道獣医師会雑誌 47 ( 12 ) 440 - 443 2003.12

家畜豚の実験使用におけるE型肝炎ウイルス対策

田中穂積, 吉野浩之, 若井拓哉, 袴田陽二, 椎貝正太, 長尾慶和, 岡本宏明, 小林英司

Organ Biology 10 ( 4 ) 339 - 347 2003.12

ピギーバック方式を用いたブタ肝移植

山内仁, 吉野浩之, 井上成一朗, 清水尚, 藤代準, 若井拓哉, 金子隆志, 高橋将文, 袴田陽二, 田中穂積, 小林英司

今日の移植 16 ( 6 ) 635 - 636 2003.11

Non-penetrating vascular closure staples (VCS) clipを用いたブタ部分小腸移植法

吉野浩之, 山内仁, 井上成一朗, 清水尚, 藤代準, 若井拓哉, 金子隆志, 高橋将文, 袴田陽二, 田中穂積, 小林英司

今日の移植 16 ( 6 ) 637 - 638 2003.11

Activity of Maturation Promoting Factor (MPF) and distribution of mitochondria in murine in vivo and in vitro matured oocytes with different culture media from IVM.

H Yoshida, N Aono, T Yoshida, T Wakai, H Sasada, E Sato

FERTILITY AND STERILITY 80 S267 - S267 2003.9

Activation of porcine reconstituted embryos by complex treatment

FUCHINOUE Kohei, KAWAHARA Manabu, WAKAI Takuya, SASADA Hiroshi, KYONO Koichi, SATO Eimei

Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌 19 ( 2 ) S17 2002.4

Combined activation of porcine oocytes injected with nuclei of fetal miniature pig cells and their subsequent development in vitro.

K Fuchinoue, M Kawahara, T Wakai, H Sasada, K Kyono, E Sato

BIOLOGY OF REPRODUCTION 66 238 - 239 2002

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