MISC - 木村　康二

ウシの子宮内膜老化細胞に対するBPTESの効果と作用機序の解明

千田鈴乃, 市川怜, 山田直季, 中村翔, 大蔵聡, 伊東楓, 杉野耀亮, 木村康二, 木村康二, 松山秀一

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   47th   2024年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

3次元培養法を用いたウシ子宮腺管腔構造の形成

杉野耀亮, 藤原希, 山本ゆき, 木村康二

組織培養研究(Web)   42 ( 2 )   2024年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

エストラジオール-17βによる直接的な卵管平滑筋収縮弛緩運動制御

窪田早耶香, 大河原里紗, 木村康二, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   46th   2023年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ子宮腺の3次元培養におけるゲル組成や添加因子がその形態変化に与える影響

杉野耀亮, 佐藤太紀, 藤原希, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   46th   2023年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ未成熟精巣の器官培養における精原細胞の増殖とセルトリ細胞機能の評価

清水亮佑, 山本ゆき, 木村康二, 永岡謙太郎

日本畜産学会大会講演要旨   131st   2023年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

牛過剰排卵処置の簡易化

木村康二

臨床獣医   41 ( 7 )   2023年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

上皮成長因子による3次元培養下でのウシ子宮腺の形態学的変化

杉野耀亮, 佐藤太紀, 藤原希, 木村康二, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   45th   2022年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

収縮能を維持した卵管平滑筋細胞の培養技術の開発

窪田早耶香, 山本ゆき, 山本ゆき, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   45th   2022年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ子宮腺による精子誘引

渡邊りお, 渡邊りお, 宗友真帆, 杉野耀亮, 木村康二

日本畜産学会大会講演要旨   130th   2022年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ポビドンヨード子宮内投与後のウシ子宮内膜における遺伝子発現変化およびside population細胞の変遷

舘林亮輝, 舘林亮輝, 中村翔, 北川悠梨, 加治佐実希, 市川怜, 森田康広, 森田康広, 大蔵聡, 木村康二, 松山秀一

日本繁殖生物学会講演要旨集(Web)   114th   P-59 - P-59   2021年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

ポビドンヨードの子宮内投与は，殺菌作用の他に子宮内膜上皮の剥離・再生を誘導することが報告されており，畜産現場においてはウシの受胎性を回復させる目的でポビドンヨードの子宮内投与が行われている。我々はこれまでに，幹細胞・前駆細胞様の特徴を持つウシ子宮内膜side population（SP）細胞が分娩後の子宮内膜再生に寄与する可能性を報告している。本研究では，ポビドンヨード投与後の子宮内膜再生機序を明らかにすることを目的に，ポビドンヨードのウシ子宮内投与後の子宮内膜細胞における遺伝子発現変化および子宮内膜SP細胞の変遷を分娩後の子宮内膜再生過程と比較，検討した。正常な発情周期を示す黒毛和種牛（11頭）を用い，発情後7日目に50 mLの2%ポビドンヨード液を各子宮角に50 mLずつ投与した。投与日を0日とし，0（投与前），2，7，14日目に子宮内膜組織をバイオプシー鉗子にて採取した。また，分娩後の黒毛和種牛（6頭）から，分娩後10，30，50，100日目に子宮内膜組織をバイオプシー鉗子にて採取した。子宮内膜組織から細胞を単離し，Hoechst33342で染色後，フローサイトメトリー解析を行い，SP細胞の割合を算出した。ポビドンヨード投与前に0.332%だったSP細胞の割合は投与後7日目（0.778%）に増加し，その後14日目（0.334%）には減少した。一方，分娩後におけるSP細胞の割合は，分娩後10日目に最も低い割合となり，分娩後100日目まで徐々に増加していた。これらの結果から，ポビドンヨード投与後は分娩後とは異なるSP細胞の変遷を経ることが示された。また，マイクロアレイ解析により，経時的に発現が変動した遺伝子について比較したところ，ポピドンヨード投与後および分娩後に共通して変動する遺伝子は少ないことが明らかとなった。以上の結果から，ポビドンヨードを子宮内に投与した後の子宮内膜再生は，分娩後のものとは異なる機序である可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.114.0_p-59

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

3次元培養におけるウシ子宮腺様構造の形成と関与する因子

杉野耀亮, 佐藤太紀, 藤原希, 山本ゆき, 山本ゆき, 木村康二, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   44th   2021年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

3次元培養したウシ卵管上皮細胞は生体組織とは異なる特有の性質を持つ

杉野耀亮, 伊藤さやか, 山本ゆき, 木村康二

日本繁殖生物学会講演要旨集(Web)   114th   OR-29 - OR-29   2021年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】卵管上皮組織における繊毛細胞と非繊毛細胞の構成比は発情ステージを通して変化し，胚輸送や発達のための最適な環境を生み出している。その詳細なメカニズムは未だ不明であるが，生体組織をそのまま用いてそのメカニズムを解明することは困難であるため，3次元培養法による体外モデルの作出が必要となる。卵管のような管腔を有する組織の上皮細胞は3次元培養下で生体組織を再現するシスト（内腔有する細胞塊）を形成する。本研究は，体外ウシ卵管上皮モデルの確立を目指し，ウシ卵管上皮細胞シストの性質を免疫組織化学にて評価した。【方法】ウシ卵管を4つの発情ステージに区分し（Irelandら, 1980），各ステージの卵管膨大部上皮細胞を 2% マトリゲル含培養液で培養した。形成したシストの Cytokeratin，Vimentin，FOXJ1，PAX8 および Acetylated-α-tubulin（AcTUB）発現を免疫組織化学を用いて検討し，上皮間葉系細胞の区分，シスト1つあたりの FOXJ1，PAX8 および AcTUB 陽性/陰性細胞割合を発情ステージ間で比較すると同時に AcTUB の局在を評価した。【結果・考察】全てのシストは Cytokeratin 陽性細胞のみで構成されていたが細胞形態の扁平化や多層化が認められた。生体組織とは異なりシスト1つあたりの FOXJ1 陽性/PAX8 陰性細胞，FOXJ1 陰性/PAX8 陽性細胞および AcTUB 陽性/FOXJ1 陽性細胞割合は発情ステージを通して変化せず，生体組織には存在しない PAX8 陽性/FOXJ1 陽性細胞や PAX8 陰性/FOXJ1 陰性細胞が認められた。また，生体組織には見られない AcTUB の細胞内凝集やシストを構成する細胞の内腔側だけでなく外部側での存在も認められた。以上から，本研究において体外で作出したウシ卵管上皮細胞シストは生体組織とは異なる性質を持つことが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.114.0_or-29

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

当帰芍薬散による卵管緊張度上昇反応のメカニズムの検討

窪田 早耶香, 山本 ゆき, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   114   OR-28 - OR-28   2021年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】適切なタイミングでの配偶子や胚の卵管輸送は妊娠の成立に不可欠であり，これは卵管平滑筋の収縮弛緩運動によって制御されている。ヒト不妊の改善法の一つとして当帰芍薬散（TSS）が処方されているが，その科学的根拠は定かでない。TSS は卵管収縮弛緩運動の促進因子として働くエストラジオール-17β（E2）様作用を有するため，E2 の受容体を介して卵管輸送能の向上に貢献する可能性がある。本研究では，TSS がG protein-coupled estrogen receptor 1（GPER1）を介してウシ卵管収縮弛緩運動に与える影響を検討した。【方法】卵巣の所見によりウシ卵管峡部を排卵直後，黄体期，排卵前の 3 つのステージに分け，長軸方向で収縮試験（マグヌス法）を行った。低濃度（100 µg/ml）および高濃度（1000 µg/ml）TSS エキス添加後1時間までの各ステージの卵管における収縮頻度，収縮弛緩力，緊張度を経時的に測定した。また，TSS 添加 20 分前に低濃度（2.5 µM）および高濃度（25 µM）の GPER1 アンタゴニスト（G-15）を添加し，同様に測定した。さらに，ウエスタンブロット法を用いて各ステージの卵管平滑筋における GPER1 のタンパク質発現量を測定した。【結果・考察】TSS は，どのステージの収縮頻度および収縮弛緩力にも有意な変化を及ぼさなかった。一方で，全てのステージにおいて有意な緊張度の増加が認められ，特に排卵直後の卵管においてその効果が高かった（P < 0.05）。また，TSS と G-15 の共添加では，高濃度 G-15 添加区において TSS 誘導性の緊張度増加は有意に抑制された（P < 0.05）。GPER1 のタンパク質発現量はステージ間で有意な差が見られなかった。以上の結果より，TSS は GPER1 を介して緊張度を増加させることで卵管収縮弛緩運動に影響する可能性がある。しかし，ステージ間で TSS の効果が異なるメカニズムについては未だ明らかとなっていないため，さらなる検討が必要である。

DOI： 10.14882/jrds.114.0_or-28

CiNii Article

researchmap

排卵前のウシ卵管峡部収縮の増大におけるギャップ結合の関与

山本 ゆき, 窪田 早耶香, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   114   OR-27 - OR-27   2021年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】哺乳動物の卵管峡部は，受精前は精子を，受精後には初期胚を輸送する。この輸送には平滑筋収縮が重要であり，排卵前後に活発になると言われているがその詳細は明らかでない。筋収縮は，電気刺激の発生と細胞間伝達，筋細胞の収縮という過程からなり，我々はこれまでに複数のイオンチャネルとギャップ結合がウシ卵管自発収縮に関与することを確認している。本研究ではこれらの因子が発情周期中の卵管収縮制御に関与するかを検討し，卵管収縮制御機構の一端を明らかにすることを目的とした。【材料と方法】1) 排卵直後（E:排卵1–4日後），黄体中後期（ML:排卵11–17日後），排卵前（F: 排卵1–3日前）のウシ卵管峡部を用いてマグヌス法による収縮試験を行い，各発情ステージにおける長軸方向の収縮頻度および振幅を検討した。2) ウシ卵管自発収縮に関与すると推定されるイオンチャネル（Cacna1c, IPTR1, RyR3, ATP2A2, ANO1, KCNN2, KCNN3）とギャップ結合因子（Cx43）について，定量的RT-PCR 法により卵管峡部平滑筋組織におけるmRNA発現量を検討した。3) 発情ステージ間で遺伝子発現量の異なる因子を選抜し，ウェスタンブロット法によりタンパク質発現量を検討した。【結果および考察】1） 発情ステージ間で，収縮頻度に有意な差は認められなかった。一方，振幅はE，ML期に対しF 期で有意に高い値を示した。排卵前の卵管峡部における振幅の増大は，精子輸送をサポートすると考えられる。2) 振幅制御に関与する各因子の遺伝子発現量を検討したところ，Cx43がF期においてML期より有意に高かった。他の因子では有意な差は認められなかった。3) Cx43タンパク質発現量は，F期でE 期よりも有意に高い値を示した。以上より，ウシ卵管峡部平滑筋において振幅の増大する排卵前にギャップ結合タンパク質の発現量が増加することが示された。ギャップ結合による細胞間刺激伝達の増加が，排卵前の振幅増大を引き起こすメカニズムの一つであると推察された。

DOI： 10.14882/jrds.114.0_or-27

CiNii Article

researchmap

ウシの子宮内膜における精子走化性因子発現の検討

宗友 真帆, 酒井 駿介, 山本 ゆき, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   66 ( Suppl. )   j78 - j78   2020年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【目的】ウシにおいて腟内に射精された精子は子宮内を通り，卵管へ運ばれる。子宮内における卵管付近までの精子輸送には平滑筋の関与が報告されているが，その詳細は完全には明らかになっていない。一方，ヒト卵胞液由来のRANTESや，ウシの卵管や顆粒膜細胞由来のSDF1などのケモカインが，受精時に精子を誘引する走化性因子として機能することが近年報告されている。このことから，子宮内における精子輸送にもこれらのケモカインが走化性因子として関与しているのではないかと考え，本研究では，発情周期中のウシ子宮内膜組織におけるケモカイン発現の変化について検討した。【方法】食肉センター由来の子宮を，卵巣の肉眼的所見によってウシの発情周期を4つに分類した（排卵日= 0日，Stage I: 1～4日，Stage II: 5～10日，Stage III: 11～17日，Stage IV: 18～20日）。各Stageの主席卵胞もしくは黄体と同側のウシ子宮角上端における子宮内膜を採取し，SDF1およびRANTES mRNA発現量の変化を定量的RT-PCR法を用いて検討した。【結果】子宮内膜組織におけるSDF1 mRNA発現は発情周期すべてのステージで見られ，Stage IVの子宮内膜組織におけるSDF1 mRNA発現はStage IIとStage IIIに比べ有意に高かった。Stage Iの子宮内膜組織においてSDF1 mRNA発現はStage IIとStage IIIと比べ高い数値を示したが，有意な差は見られなかった。SDF1と同じく，子宮内膜組織におけるRANTESのmRNA発現は発情周期すべてのステージで検出されたが，Stage間での有意な差は認められなかった。以上より，これらの走化性因子が子宮角上端付近に発現し，精子の誘引に関係している可能性が示された。さらに，SDF1は発情前後に発現が増加していたことからエストラジオール17βなどの性ステロイドホルモンの影響を受けて発現が制御される可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.113.0_p-67

CiNii Article

researchmap

ウシ子宮内膜side population(SP)細胞の遺伝子発現解析と分娩後におけるSP細胞割合の推移

舘林 亮輝, 中村 翔, 美辺 詩織, 古澤 軌, 阿部 良哉, 加治佐 実希, 森田 康広, 大蔵 聡, 木村 康二, 松山 秀一

The Journal of Reproduction and Development   66 ( Suppl. )   j41 - j41   2020年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

researchmap

当帰芍薬散がウシ卵管収縮弛緩運動に与える影響

窪田 早耶香, 山本 ゆき, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   66 ( Suppl. )   j75 - j75   2020年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【目的】初期胚や配偶子の輸送には卵管収縮弛緩運動が不可欠であり，その異常は不妊の原因の1つと考えられている。婦人科系の諸症状を改善する三大漢方薬の1つとして知られている当帰芍薬散（TSS）は，当帰・芍薬・川芎・茯苓・蒼朮・沢瀉の6つの成分から構成されている。TSS は，プロスタグランジン（PG）F2α惹起の子宮収縮を抑制する作用や，エストロジェンレセプター (ER)αや ERβを介さないE2様作用を示す。また，TSS 構成成分の一つである当帰や芍薬中のペオニフロリンが卵管収縮弛緩因子である PGE2 産生を抑制することから，TSS と卵管収縮弛緩因子との関連性が示唆されている。本研究では，TSS の卵管収縮弛緩運動を改善させる不妊治療への有用性を明らかにする目的で，TSS がウシ卵管収縮に与える影響を検討した。【方法】ウシ卵管峡部組織を子宮側から5 mm ずつ 3 片に切り取り，マグヌス法を用いてクレブスリンガー液（KRS）で溶解した TSS エキス（100 µg/ml, 1000 µg/ml）添加後1時間までの収縮頻度，振幅，緊張度を経時的に測定した。使用したウシ卵管組織は，卵巣の所見により排卵直後，黄体期，排卵前の3つのステージに分け，各ステージの TSS の影響を検討した。【結果・考察】収縮頻度および振幅は，どのステージにおいても有意な変化は見られなかった。一方で，緊張度は全ステージで有意に亢進した（P < 0.05）。排卵直後の卵管では対照区に対して100 µg/ml および1000 µg/ml TSS エキス添加で，その他の卵管では1000 µg/ml TSS エキス添加でのみ緊張度の有意な亢進が観察された（P < 0.05）。TSS エキス添加前からの経時的な変化を検討したところ，排卵直後の卵管では添加 9 分後以降，その他の卵管では添加 30 分後以降に有意な上昇が認められた（P < 0.05）。以上の結果から，TSS は緊張度を亢進させることでウシ卵管収縮運動を促進しており，特に排卵直後の卵管において，その効果が高いことが示された。

DOI： 10.14882/jrds.113.0_p-62

CiNii Article

researchmap

培養ウシ卵管平滑筋細胞のCa2+変動解析

山本 ゆき, 石本 健太, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   66 ( Suppl. )   j76 - j76   2020年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【目的】卵管は平滑筋の自発的な収縮弛緩運動によって配偶子や初期胚を輸送する。筋収縮には細胞内Ca²⁺濃度の上昇が必須であり，我々はこれまでに，培養ウシ卵管平滑筋細胞が自発的なCa²⁺変動を示すことを見出している。しかしその変動パターンや制御機構は明らかでない。本研究では培養卵管平滑筋細胞のCa²⁺変動パターンやCa²⁺濃度上昇に関与するメカニズムを検討し，卵管平滑筋細胞の収縮活動制御機構を明らかにすることを目的とした。【方法】ウシ卵管峡部より単離，培養した平滑筋細胞のライブセルCa²⁺イメージングを実施した。撮影した動画を用いて，1）Spatio-Temporal Mapping 解析による細胞内Ca²⁺上昇の伝播パターン，2）低密度（<70% コンフルエント）および高密度（>100%コンフルエント）状態における培養平滑筋細胞のCa²⁺上昇パターンとCa²⁺パルス頻度，3）電位依存性Ca²⁺チャネル（VDCC），IP₃受容体，リアノジン受容体の阻害剤が培養平滑筋細胞のCa²⁺変動に与える影響，について検討した。【結果】1）細胞内Ca²⁺変動には，同時に細胞全体のCa²⁺濃度が上昇するFlashと，細胞の端から逆方向へウェーブ状に伝播するWaveの2種類のパターンが認められた。2）低密度の状態では，WaveよりFlashを示す細胞数が有意に多かったが，高密度の状態ではWaveを示す細胞数が増加した。また，Wave を示す細胞のCa²⁺パルス頻度が低密度状態に対して高密度において有意に高かった。一方，Flash を示す細胞のパルス頻度は密度によって変化しなかった。細胞間接着がCa²⁺Waveの発生に関与することが推察された。3）VDCCおよびリアノジン受容体阻害剤は細胞内Ca²⁺変動に影響を及ぼさなかったが，IP₃受容体阻害剤は直ちにCa²⁺パルスを数分間停止させた。培養ウシ卵管平滑筋細胞の自発的Ca²⁺変動は，小胞体上のIP₃受容体の開口によって発生することが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.113.0_p-63

CiNii Article

researchmap

ウシ卵管上皮細胞の3次元培養における細胞凝集体およびシスト形成能の評価

杉野 耀亮, 伊藤 さやか, 佐藤 太紀, 酒井 駿介, 梅原 依吹, 窪田 早耶香, 宗友 真帆, 山本 ゆき, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   66 ( Suppl. )   j76 - j76   2020年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【目的】卵管は子宮と卵巣の間に位置し，胚の輸送や発達などの生殖機能の維持に重要である。この上皮組織は主に繊毛細胞と分泌細胞で構成され，その細胞構成比は発情周期によって変化することが明らかとなっているが，未だこの詳細なメカニズムは不明である。そこで我々はこれを解明するために，卵管上皮組織を体外で再現することに着目した。一般的に，上皮細胞は細胞外基質内での3次元培養下で細胞凝集体を形成後，立体的な胞状構造（シスト）を形成することで知られる。本研究は，ウシ卵管上皮細胞を3次元培養し，細胞凝集体およびシスト形成能を評価した。【方法】食肉センター由来のウシ卵管を卵巣の肉眼的所見をもとに4つの発情周期（stageⅠ～Ⅳ）に区分した（Irelandら, 1980）。各発情周期の卵管膨大部から上皮組織を回収し，酵素処理および濾過より細胞懸濁液を得た。2%マトリゲル，10% FBS加DMEM/F12で再懸濁後，マトリゲルでコートした48穴プレートに 1.0, 2.5, 5.0×10⁵ cells/well となるよう播種した。14日間培養後，実体顕微鏡下で細胞凝集体および内腔を有する細胞外層が明瞭な構造体（シスト）を回収し，それぞれの形成数およびシスト形成率・外径を評価した。【結果・考察】どの発情周期の卵管上皮細胞においても凝集体およびシストは形成された。凝集体形成数はstageⅠからstageⅢにかけて有意に減少し（P<0.05），stageⅢとstageⅣでは同程度だった。また細胞播種濃度依存的に有意に増加した（P<0.05）。一方，シスト形成数，形成率および外径は発情周期間で有意な差はなかったが，細胞播種濃度依存的に有意に増加した（P<0.05）。以上から，発情周期の変化は細胞凝集体形成に影響する一方で，シスト形成能には影響しないことが示され，各発情周期のウシ卵管上皮細胞には一様にシストを形成する能力があると考えられる。

DOI： 10.14882/jrds.113.0_p-64

CiNii Article

researchmap

暑熱環境下におけるウシ子宮内膜間質細胞は小胞体ストレス応答経路を介してIL-6発現を増加させる

酒井 駿介, 山本 ゆき, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   66 ( Suppl. )   j41 - j41   2020年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【背景】分娩後のウシは子宮腔への細菌侵入により子宮内膜炎を発症する。これに対し，子宮内膜細胞は細菌を認識してIL-6を分泌し，免疫細胞を子宮内膜上皮層まで誘引することで子宮内膜炎は治癒する。子宮内膜炎を夏季に発症した場合，症状の長期化が報告されており，申請者は暑熱環境下の子宮内膜間質細胞におけるIL-6産生増加がこの一因である可能性を示してきた。ストレス下の細胞内では変性タンパク質が増加し，小胞体ストレスを生じる。様々な疾患においても小胞体ストレスはIL-6の過剰分泌を伴う慢性炎症の原因となる。本研究では，暑熱環境下で培養した子宮内膜間質細胞における小胞体ストレスの有無，小胞体ストレスとIL-6産生の関係性を検討した。【材料】単離した子宮内膜間質細胞にリポ多糖（LPS）を添加し，38.5℃もしくは40.5℃で培養し，BiP mRNA発現（小胞体ストレスマーカー）を定量的RT-PCR法によって測定した。さらに，間質細胞にLPSと同時に各種小胞体ストレス応答経路阻害剤（Toyocamycin，KIRA6およびSalubrinal），または小胞体ストレス促進剤（NaF）をそれぞれ添加後，38.5℃もしくは40.5℃で培養し，IL-6 mRNA発現の変化を定量的RT-PCR法を用いて測定した。【結果】暑熱環境下で培養した子宮内膜間質細胞においてBiP mRNA発現は有意に増加した。また，暑熱によるIL-6 mRNA発現増加は各種小胞体ストレス応答経路阻害剤により有意に抑制された。さらに，NaF添加により，暑熱環境下における間質細胞のIL-6 mRNA発現は変化しない一方で，38.5℃で培養した間質細胞においてIL-6 mRNA発現は有意に増加し，暑熱環境下での発現レベルと有意な差は見られなかった。以上の結果から，ウシ子宮内膜間質細胞は暑熱環境下において小胞体ストレス応答経路を介して過度にIL-6を分泌し，夏季の子宮内膜炎症状長期化の一因となる可能性が考えられる。

DOI： 10.14882/jrds.113.0_aw1-3

CiNii Article

researchmap

ウシの発情周期中における卵管自発収縮の制御機構

山本ゆき, 山本ゆき, 小川泰司, 黒川真帆, 窪田早耶香, 木村康二, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   43rd   2020年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

暑熱ストレスは小胞体ストレスを介して子宮内膜間質細胞のIL6発現を増加させる

酒井駿介, 山本ゆき, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   43rd   2020年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ外子宮口粘膜組織におけるIFIT1の妊娠特異的発現

浅岡 那月, 國井 宏樹, 古山 敬祐, 窪 友瑛, 浜口 悠, 小川 英彦, 小林 久人, 唄 花子, 川原 学, 木村 康二, 高橋 昌志

The Journal of Reproduction and Development   65 ( Suppl. )   j129 - j129   2019年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

<p>【目的】反芻動物特異的な妊娠認識物質であるインターフェロン・タウ（IFNT）は着床前後期には母体子宮内膜においてIFN誘導遺伝子群（ISGs）の発現を誘導する。ISGsは妊娠認識や着床に関与するとともに，早期受胎判定としての利活用も期待されている。我々はこれまでに，ISGsの一種であるISG15, MX1, MX2が外子宮口内腔および腟底部壁の粘膜組織においても妊娠特異的な高発現誘導を示すことを明らかにしたが，子宮外組織における他の妊娠応答遺伝子に関する知見はない。そこで子宮外組織における網羅的な遺伝子発現解析をもとにウシ子宮外組織における妊娠応答遺伝子の探索と妊娠検出を目的とした。【方法】人工授精（AI）実施後，18日後のホルスタイン種乳用牛から採取した外子宮口粘膜（CM）における発現解析をRNA-seqにより行い，候補遺伝子としてinterferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1（IFIT1）を選出した。AI後14，18，24日目に同組織の採取を行い，妊娠の成否はAI後30日目と45日目の妊娠診断で判断した。またIFNT誘導性を検証するために，食肉公社から採取した非妊娠ウシCM組織を採取・細切後，組み換えウシIFNTを添加して24時間培養しIFIT1発現を解析した。【結果】AI後18日目に採取したCMにおいては，IFIT1が非妊娠サンプルと比較して妊娠サンプルで発現量の増加傾向がみられた。さらに14，18，24日目におけるIFIT1の遺伝子発現の経時的変化を調べたところ，IFNT産生ピークである18日目を頂点とした挙動を示した。また，IFIT1のIFNT誘導性については，IFNT添加CMで発現量が増加する傾向があった。これらの結果から妊娠初期のCMにおけるIFIT1発現にはIFNTの関与ならびに早期妊娠応答の新たな指標の可能性が示唆された。</p>

DOI： 10.14882/jrds.112.0_P-71

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

【Female genital tractの収縮を再考する】卵管の平滑筋収縮

木村 康二

HORMONE FRONTIER IN GYNECOLOGY   26 ( 3 )   185 - 189   2019年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(株)メディカルレビュー社  

卵管の平滑筋の運動は配偶子や胚の輸送を担う重要な機能の1つである。卵管の平滑筋は自律的な収縮弛緩による蠕動運動を行うことで輸送機能は果たしている。消化管と同じくある種のペースメーカー細胞の存在が示唆されているが、その詳細はいまだ解明されていない。また、卵管の平滑筋による輸送機能は性周期に依存して変化しており、これは卵巣由来の性ステロイドホルモンの直接または間接的な影響によるものと考えられている。(著者抄録)

DOI： 10.34449/j0015.26.03_0029-0033

CiNii Books

researchmap

排卵前後のウシ卵管上皮における繊毛形成過程の進行

伊藤 さやか, 山本 ゆき, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   65 ( Suppl. )   j83 - j83   2019年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【目的】卵管上皮には繊毛細胞および分泌細胞（非繊毛細胞）が存在し，両細胞の割合は発情周期を通じて変化する。我々は，繊毛細胞の割合が増加するにもかかわらず分裂するのは非繊毛細胞のみであること（Ito ら, 2016），卵管上皮には非繊毛細胞から繊毛細胞への段階的な細胞が存在すること（第111回大会）を明らかにしており，非繊毛細胞が繊毛細胞へと分化することを示唆してきた。本研究では，繊毛形成過程に注目した卵管上皮細胞の詳細なキャラクタリゼーションを行うことにより，ウシ卵管における非繊毛細胞から繊毛細胞への分化経路のさらなる検討を行った。【方法】各発情周期のウシ卵管膨大部上皮組織におけるKi67，Acetylated tubulin（Ac tubulin: 繊毛マーカー），繊毛形成に必須の転写因子FOXJ1およびMYB，細胞周期の制御に関わる転写因子PAX8の共局在を免疫組織化学により検討し，上皮組織内腔表面1 mmあたりの細胞数の変化を調べた。その後各発情周期の卵管上皮細胞におけるMYBおよびFOXJ1 mRNA 発現を調べた。【結果】全ての卵管上皮細胞はPAX8かFOXJ1を発現し，共発現する細胞は存在しなかったが，FOXJ1⁺細胞中にはAc tubulin⁺細胞とAc tubulin^-細胞が存在した。よって，非繊毛細胞はPAX8⁺細胞とFOXJ1⁺細胞に分類されることが明らかとなった。非繊毛細胞中にはMYB⁺/PAX8⁺またはMYB⁺/FOXJ1⁺細胞が存在し，MYB⁺/Ki67⁺細胞は認められなかった。Ki67⁺および MYB⁺細胞数は卵胞期に増加した。卵管上皮細胞におけるMYB mRNA発現は卵胞期に有意に減少した一方，FOXJ1 mRNA発現は増加した。このことから，排卵前後に卵管上皮構成細胞が大きく変化すると同時に繊毛形成関連遺伝子の発現も変動することが明らかとなった。本研究より，ウシ卵管上皮の一部の非繊毛細胞は排卵前に繊毛形成過程に入り，排卵後に繊毛形成が完了することが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.112.0_or2-11

CiNii Article

researchmap

ウシ子宮内膜細胞によるマクロファージ誘引に対する暑熱ストレスの影響

酒井 駿介, 山本 ゆき, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   65 ( Suppl. )   j128 - j128   2019年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【背景】分娩後子宮腔への細菌侵入によりほぼすべてのウシは子宮内膜炎を発症する。これに対し，子宮内膜細胞は様々なマクロファージ（MΦ）誘引物質を分泌し，主要感染部位である子宮内膜上皮層へMΦを呼び込み，細菌を除去することで子宮内膜炎を治癒する。しかし，夏季に子宮内膜炎を発症した場合，症状が長期化し，夏季不妊の一因と考えられている。本研究ではこの夏季の子宮内膜炎治癒の遅延は暑熱ストレスによる子宮内膜の免疫機能低下によると仮定し，暑熱環境下での子宮内膜細胞の免疫反応および MΦの走化性を検討した。【方法】単離した子宮内膜上皮および間質細胞にリポ多糖（LPS）を添加後，38.5°Cまたは 40.5°Cで培養した。培養終了後，MCP1 の遺伝子発現および上清中の濃度を定量的 RT-PCR または EIA によってそれぞれ測定した。また，ウシ静脈血から単離した単球をMΦに分化後，38.5°Cまたは 40.5°Cで培養し，CCR2 遺伝子発現を定量的 RT-PCR により測定するとともに，暑熱環境下でのMΦの走化性を Migration Assay によって検討した。【結果】38.5°Cで培養した子宮内膜上皮および間質細胞において MCP1 遺伝子発現は LPS により有意に増加した。しかし，40.5°Cで培養した上皮細胞において LPS 刺激性 MCP1 遺伝子発現は有意に抑制され，反対に間質細胞では有意に増加した。また，上皮細胞において MCP1 分泌は暑熱ストレスおよび LPS の有無にかかわらず検出限界以下だった（<0.15 ng/ml）。一方，38.5°Cで培養した間質細胞において LPS 刺激性 MCP1 産生は暑熱ストレスによって有意に増加した。また，MΦにおける CCR2 遺伝子発現および走化性に暑熱ストレスは影響しなかった。以上のことから，暑熱ストレスは MΦ の遊走性に影響しない一方，子宮内膜間質細胞の MCP1 産生を増加させることで，MΦが上皮層へ誘引されず，間質層に留まり，夏季の子宮内膜炎症状が長期化する一因となることが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.112.0_p-69

CiNii Article

researchmap

ウシ子宮内膜side population細胞における幹細胞マーカーの発現解析

舘林 亮輝, 中村 翔, 美辺 詩織, 古澤 軌, 阿部 良哉, 森田 康広, 大蔵 聡, 木村 康二, 松山 秀一

The Journal of Reproduction and Development   65 ( Suppl. )   j133 - j133   2019年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【目的】ウシの子宮内膜は分娩時の胎盤剥離とともに大きく損傷する一方で，速やかに再生されることにより再び受胎可能な状態となる。この子宮内膜の再生時に生じる不具合が受胎性の低下を引き起こすと考えられるが，ウシの分娩後における子宮内膜再生メカニズムは未だ明らかでない。子宮は中胚葉由来の組織であり，ヒトの月経周期毎に起こる子宮内膜更新には子宮内膜の間葉系幹細胞が関与することが示唆されている。我々は，組織幹細胞の集団として考えられているside population細胞（SP細胞）がウシ子宮内膜間質細胞に存在することを明らかにしており，ウシの分娩後においても子宮内膜の間葉系幹細胞が子宮内膜再生に寄与する可能性が考えられた。本研究では，ウシ子宮内膜SP細胞が幹細胞の特徴を有することを確認するため，SP細胞およびmain population細胞（MP細胞）における幹細胞マーカー遺伝子の発現量を比較，検討した。【方法】食肉センター由来のウシ子宮（n=4）からコラゲナーゼ処理により子宮内膜間質細胞を単離した。Hoechst33342にて染色後，フローサイトメトリー解析により蛍光強度の低い領域に突出した細胞集団として確認した細胞のうち，ABCG2の阻害剤であるベラパミル存在下で消失した細胞をSP細胞として同定した。また，蛍光強度が高い主要な細胞集団をMP細胞として，セルソーターにより各細胞をそれぞれ分取した。各々の細胞でRNAを抽出し，qRT-PCR法を用いて，間葉系幹細胞マーカー遺伝子であるMCAMおよびABCG2のmRNA発現量を測定した。【結果】今回採取した子宮内膜間質細胞におけるSP細胞の割合は，2.13±0.43%であった。SP細胞におけるMCAM mRNA発現量は，MP細胞と比較して有意に高かった（P<0.05）。また，ABCG2 mRNA遺伝子発現量についてはSP細胞で高い傾向にあった（P=0.053）。これらの結果から，SP細胞の遺伝子発現は間葉系幹細胞としての特徴を持つことが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.112.0_p-79

CiNii Article

researchmap

ウシ卵管培養平滑筋細胞におけるカルシウムオシレーション制御メカニズムの探索

山本 ゆき, 黒川 真帆, 木村 康二

The Journal of Reproduction and Development   65 ( Suppl. )   j134 - j134   2019年9月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本繁殖生物学会  

【背景】卵管などの平滑筋組織は一般的に，様々なイオンおよびイオンチャネルによって律動的な自発収縮を生み出している。著者らはこれまでに，ウシ卵管組織片を用いて自発収縮に関与するイオンチャネルを明らかにした。さらに詳細な細胞機能を検討するため，培養卵管平滑筋細胞のカルシウム変動を観察したところ様々なパターンの自発的オシレーションが認められた。細胞内カルシウム濃度の上昇は筋収縮を引き起こすことから，このオシレーション制御機構の検討は自発収縮発生メカニズムの解明につながる。そこで培養ウシ卵管平滑筋細胞のカルシウムオシレーションを制御する機構について，1) カルシウムチャネル［電位依存性カルシウムチャネル（VDCC）および小胞体上カルシウムチャネル（IP3Rおよび RyR）］，2) 卵管収縮を亢進するホルモン（オキシトシン:OT），3) 細胞密度の関連，を検討した。 【結果および考察】1) 卵管組織の自発収縮を抑制したVDCCブロッカーの添加，または IP3R阻害剤とRyR阻害剤の共添加では，コントロールと同様に時間に伴いオシレーション回数が低下した。オシレーションに必要なカルシウム供給経路について他のチャネルや機構の可能性が考えられた。2) OT添加後1–2 分においてわずかにオシレーション頻度が上昇した。しかし細胞個々に解析すると，細胞によってOTへの反応が異なることが明らかとなった。OT受容体発現の有無や細胞周期との関係など，細胞の状態の違いを検討する必要がある。3) コンフルエント前（<70%）とコンフルエントの状態でカルシウム変動周期を解析および比較したところ，コンフルエント状態において高頻度の周期を示す細胞が有意に増加した。このことから細胞密度の増加がカルシウムオシレーションの頻度制御に関与していることが明らかとなった。その詳細なメカニズムについては今後検討を進める。

DOI： 10.14882/jrds.112.0_p-82

CiNii Article

researchmap

ウシ主席卵胞および次席卵胞の顆粒層細胞において発現する遺伝子の網羅的解析

大下 雪奈, 渡辺 雄貴, 春日 崇, 中平 陽子, 棟朝 亜理紗, 木村 康二, 松山 秀一, 大蔵 聡, 真方 文絵, 松田 二子

日本獣医学会学術集会講演要旨集   162回   439 - 439   2019年8月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本獣医学会  

researchmap

インターフェロン-τ化学合成ペプチドによるウシ子宮内膜細胞活性リガンド領域の探索

鈴木 惇文, 木村 康二, 唄 花子, 川原 学, 高橋 昌志

北海道畜産草地学会報   7 ( 1 )   7 - 15   2019年

　詳細を見る

記述言語：英語   出版者・発行元：北海道畜産草地学会  

<p>インターフェロン-τ（IFN-τ：195 aa）は反芻動物特異的に分泌される分子であり、妊娠認識及び妊娠の成立に重要な役割を持っている。IFN-τの研究には組換え体が用いられている。しかし、組換え体は作製、入手の難しさや様々な法律による生体投与への使用制限のため、生体研究の妨げとなっている。そこで、本研究では組換え体に変わるIFN-τ構成ペプチドを化学合成し、活性リガンド部位の探索並びに、効果の評価検証を目的とした。IFN-τのアミノ酸配列や立体構造を考慮し、11種のペプチド（長鎖：27-28 aa, 短鎖：7-17 aa）を化学合成した。先ず、ペプチドを培養子宮内膜間質細胞に添加し、インターフェロン刺激遺伝子（ISGs）の遺伝子発現量を測定することでIFN-τ活性の有無を評価した。次に、組換えIFN-τとペプチドを同時に添加することでペプチドとIFN-τの競合を評価した。組換えIFN-τの添加によってISGsの発現量の増加がみられたが、合成ペプチドの添加による増加はみられなかった。また、組換えIFN-τとペプチドの同時添加によるISGsの抑制もみられなかった。そのため、今回合成したペプチドは活性リガンド領域を有していない、もしくは立体構造が変化したため、受容体への結合能を十分に有していないことが示唆された。</p>

DOI： 10.32253/hlgs.7.1_7

CiNii Article

CiNii Books

J-GLOBAL

researchmap

ウマ子宮内膜におけるPGF2α自己増幅機構

香西 圭輔, 徳山 翔太, Szostek Anna Z, 登石 裕子, 角田 修男, 田谷 一善, 阪谷 美樹, 高橋 昌志, 南保 泰雄, Skarzynski Dariusz J, 山本 ゆき, 木村 康二, 奥田 潔

馬の科学 = Equine science   56 ( 4 )   282 - 293   2019年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：日本中央競馬会競走馬総合研究所  

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

暑熱環境下におけるウシ子宮内膜細胞のマクロファージ走化性物質産生の変化

酒井駿介, 山本ゆき, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   42nd   2019年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

卵管自発収縮に関わるイオンチャネルと培養平滑筋細胞内カルシウム変動

山本ゆき, 山本ゆき, 黒川真帆, 小川泰司, 木村康二, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   42nd   2019年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

着床前ウシ頸管および外子宮口周辺粘膜におけるインターフェロン誘導遺伝子の発現

国井宏樹, 伊藤月乃, 小木曽貴季, 鈴木惇文, 古山敬祐, Md. Abdus, Shabur Talkder, Balboula Ahmed Zaky, 唄 花子, 川原 学, 永野昌志, 木村康二, 高橋昌志

北海道牛受精卵移植研究会会報   37   17 - 17   2018年8月

　詳細を見る

記述言語：日本語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（全国大会，その他学術会議）  

researchmap

ウシ黄体におけるbetaglycanの役割とその発現調節

長谷川啓喜, 山下真路, 伊藤典彦, 岡本芳晴, 窪友瑛, 伊賀浩輔, 木村康二, 菱沼貢, 奥田潔, 西村亮, 西村亮

日本畜産学会大会講演要旨   124th   205 - 205   2018年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本畜産学会  

J-GLOBAL

researchmap

ウシ伸長期胚の非外科的移植技術—Non-surgical Transfer Method of Elongating Bovine Conceptus

木村, 康二

岡山大学農学部学術報告   107   19 - 24   2018年2月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：岡山大学農学部  

The objectives of the present study were to establish a non-surgical transfer method for elongating bovine conceptuses and to combine this method with biopsy and sexing. Bovine conceptuses were recovered from donor cows on day 13-14 of the estrus cycle. In experiment 1, day 13 conceptuses were transferred to recipient cows using a standard day 7 embryo transfer (ET) method. The pregnancy rate of day 13 conceptus transfer (CT) is comparable to that of day 7 ET. In experiment 2, day 14 conceptuses were transferred using modified methods (balloon catheters or ET guns with modified sheaths). Using the standard ET method, no pregnancies were obtained;however, when balloon catheters or ET guns with modified sheaths were used, the pregnancy rates after CT were 48.0％ and 44.8％, respectively. In experiment 3, day 14 conceptuses were biopsied without a micromanipulator, sexed using the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method, and transferred to recipient cows. The pregnancy rate of biopsied conceptuses was 46.2％ and did not differ significantly from that of unbiopsied with conceptuses. Moreover, all pregnant cows transferred conceptuses following biopsy and sexing delivered calves with the expected sexes. These results suggested that the non-surgical bovine conceptus transfer (CT) method was comparable to day 7 ET, and that this technique enables biopsy and sexing without expensive equipment such as a micromanipulator or specialized skills.

CiNii Article

researchmap

ウシ子宮内膜上皮細胞を用いた暑熱負荷培養およびインターフェロン・タウ応答性の検証

小松 正明, 鈴木 惇文, 国井 宏樹, 川原 学, 木村 康二, 高橋 昌志, 唄 花子

日本繁殖生物学会 講演要旨集   111 ( 0 )   P - 38-P-38   2018年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：日本繁殖生物学会  

<p>【目的】夏期の暑熱ストレスは，人工授精受胎率低下を引き起こすなど，家畜繁殖性に悪影響を与えることが知られている。これまでに，ウシの卵子や卵巣，胚に対する暑熱ストレスの影響は報告されているが，母体子宮への影響は不明である。ウシを含む反芻動物の妊娠認識および成立はインターフェロン・タウ（IFNT）が役割を担う。IFNTは孵化後の胚から産生され，子宮内膜上の I 型IFN受容体（IFNAR）を介して働き，黄体退行を抑制する。また，インターフェロン誘導性因子（ISGs）の発現を誘導する。本研究ではこの妊娠認識に着目し，子宮内膜上皮細胞におけるIFNT応答性を暑熱負荷培養条件下で評価し，子宮への暑熱ストレスの影響を検証した。【方法】食肉検査場由来ウシ子宮から子宮内膜組織を採取し，上皮細胞を単離，培養した。単離した上皮細胞をウシの平常時の体温である38.5 ℃および暑熱時の体温である40.5 ℃の暑熱条件下で3，6，12時間培養後，RNA抽出，cDNA合成を行い，定量PCRにより暑熱ストレス指標である熱ショックタンパク質（HSP）群の発現を解析した。また，上皮細胞を同様の暑熱負荷条件下にて組換えウシIFNT（500 IU）を添加し12時間培養した。各処理区において定量PCRによるISGs（ISG15, MX1a）およびIFNAR（IFNAR1, IFNAR2）の発現解析を行った。【結果と考察】HSPのmRNA発現量は，12時間の暑熱負荷によりHSP27, 60, 90の全てが対照区と比べ有意に上昇した。この結果から，12時間の暑熱処理により，細胞への十分なストレス負荷が確認された。ISGs の発現はIFNT添加により有意に増加したが，暑熱負荷による影響はみられなかった。また，IFNAR発現へのIFNT添加および暑熱の影響もみとめられなかった。以上より，培養子宮上皮細胞でのIFNAR発現およびIFNTによるISGs（ISG15, MX1a）発現への暑熱ストレスの影響は少ないことが示唆された。</p>

DOI： 10.14882/jrds.111.0_P-38

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

暑熱によるウシ子宮内膜のプロスタグランジン分泌増加と温度感受性チャネルの関係

山田亜依, 高見恵都, 酒井駿介, 山本ゆき, 山本ゆき, 木村康二, 木村康二

Journal of Reproduction and Development   64 ( Suppl Japanese Issue )   P-39 - P-39   2018年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】地球温暖化に伴い夏季のウシ受胎率の低下が問題視されており，暑熱ストレス （HS）による生殖系内分泌の異常がその一因として考えられている。これまでに，我々は培養ウシ子宮内膜間質細胞においてHSが プロスタグランジン（PG）分泌を促進することを報告したが（Sakai et al., JRD, 2018），そのメカニズムは明らかにされていない。細胞の温度感受性システムとしてTransient Receptor Potential（TRP）チャネルの関与が報告されている。TRPチャネルは細胞膜に存在するイオンチャネル型受容体の1つであり，その中でも特に体温付近でTRPV3・V4・M2が機能することが明らかとなっている。そこで，本研究ではウシ子宮内膜においてHS環境下でのPG産生に対するTRPV3・V4・M2の関与について検証した。【方法】ウシ子宮内膜組織において，TRPV3，V4，およびM2 の局在を免疫組織化学により調べた。また，培養ウシ子宮内膜間質細胞にTRPV3またはV4阻害剤を0, 10, 100, 1000nM，もしくはTRPM2阻害剤を0, 10, 50, 100 µMの濃度で添加し，それぞれを40.5°Cもしくは38.5°Cで培養した。培養終了後，上清中のPG濃度をEIAにより測定した。【結果】TRPV3はウシ子宮内膜において明瞭な発現は観察されなかったが，TRPV4はわずかに内腔上皮細胞のみで検出された。TRPM2は子宮内膜組織の全域に局在し，特に内腔上皮細胞および腺上皮細胞では，間質細胞・子宮筋層・血管内皮細胞よりも強く検出された。子宮内膜間質細胞におけるPG産生はHSによって増加し，TRPV3・V4阻害剤添加はこの増加を抑制しなかった。一方，TRPM2阻害剤添加はHSによるPG分泌増加を有意に抑制した（P <0.05）。これらの結果より，温度感受性TRPチャネルはウシ子宮内膜に発現し，その中でも特にTRPM2がHSによるPG分泌上昇に関与する可能性が示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.111.0_p-39

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシ卵管自発収縮に関与するイオンチャネルと平滑筋細胞内カルシウム変動の解析

山本ゆき, 山本ゆき, 黒川真帆, 小川泰司, 木村康二, 木村康二

Journal of Reproduction and Development   64 ( Suppl Japanese Issue )   OR2-14 - OR2-14   2018年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】卵管は律動的自発収縮が引き起こす蠕動運動により初期胚を子宮へ輸送するが，収縮の制御機構は明らかでない。消化管では内在性のペースメーカーが自発的に脱分極し，その刺激が平滑筋細胞に伝達されて蠕動運動が起こる。この機構にはイオンの流出入による膜電位変化が重要であり，また平滑筋細胞の収縮には細胞内Ca²⁺濃度の上昇が必須である。本研究では，これらの基礎知見を基にウシ卵管蠕動運動の発生・制御機構を明らかにすることを目的とした。【方法】1）ウシ卵管自発収縮に関与するチャネルを明らかにするため，収縮試験（マグヌス法）を用いてA) Ca²⁺供給経路：電位依存性Ca²⁺チャネル（VDCC），小胞体Ca²⁺放出チャネル（IP3R，RyR），B) 脱分極誘発：Na⁺チャネル，Cl^-チャネル，C) 再分極および過分極：電位依存性Kチャネル（VDKC）およびCa²⁺依存性Kチャネル（BK，SK），D) 細胞間刺激伝達：ギャップジャンクション（GJ）が収縮に与える影響を検討した。2）培養平滑筋細胞内Ca²⁺を可視化し，細胞内Ca²⁺変動を解析した。【結果および考察】1）A) VDCC阻害により収縮の振幅は減少した。IP3RとRyRを同時に阻害すると収縮回数と振幅が減少した。VDCCを介した細胞外Ca²⁺流入と小胞体からのCa²⁺放出が自発収縮に必須であることが示された。B) Cl^-チャネル阻害により収縮回数が減少したため，脱分極の発生に関与する可能性が示された。C) VDKC阻害は収縮回数および振幅を減少させた。BK阻害は収縮回数を減少させた一方，BKとSK阻害ではそれぞれ振幅が増加した。VDKC，BK，SKのいずれも再分極・過分極に関与する可能性が示された。D) GJ阻害が収縮を抑制したため，細胞間刺激伝達はGJを介することが示された。2）培養平滑筋細胞がコンフルエントの状態においてCa²⁺変動が観察されたため，Ca²⁺変動の発生には細胞間接着が必要であると示された。

DOI： 10.14882/jrds.111.0_or2-14

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシ卵管上皮構成細胞のタンパク質発現解析による分化経路の推測

伊藤さやか, 山本ゆき, 木村康二

Journal of Reproduction and Development   64 ( Suppl Japanese Issue )   P-40 - P-40   2018年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】卵管上皮は初期胚の輸送を促す繊毛細胞ならびに，初期胚発育に必要な物質を分泌する分泌細胞（非繊毛細胞）の2 種類から構成される。繊毛細胞の数は排卵時に多い一方，その後は非繊毛細胞の数が増加する。我々は，繊毛細胞数が増加するにもかかわらず増殖するのは非繊毛細胞のみであることを明らかにしており，非繊毛細胞が繊毛細胞へと分化することを示唆してきた。卵管と同様に繊毛・非繊毛細胞を有する気管においては，複数の非繊毛細胞が存在し，その一部の細胞が繊毛細胞へと分化することが報告されている。しかし，これまでにウシ卵管において複数の非繊毛細胞の存在は報告されていない。本研究では，ウシ卵管における非繊毛細胞から繊毛細胞への分化経路を明らかにするために，卵管上皮細胞の詳細なキャラクタリゼーションを行った。【方法】発情周期を通じたウシ卵管膨大部上皮組織におけるacetylated α tubulin（繊毛マーカー），ODF2（基底小体タンパク），繊毛形成に関わるFOXJ1ならびに細胞周期の制御に関わるPAX8の共局在を免疫組織化学により検討し，上皮組織250 µmあたりに存在する細胞数の変化を調べた。また，Ki67（細胞分裂マーカー）との関連を調べた。【結果】全ての卵管上皮細胞はPAX8またはFOXJ1を発現し，共発現する細胞は存在しなかった。FOXJ1陽性細胞のうちacetylated α tubulinを共発現していない細胞集団が約10% 存在し，同細胞中にはODF2を発現する細胞が認められた。卵胞期において，Ki67陽性細胞が増加すると共に，PAX8陽性細胞ならびにFOXJ1陽性細胞の数が増加した。以上より，卵管上皮細胞は形態学的には繊毛細胞と非繊毛細胞に大別されるが，免疫組織学的に分類すると非繊毛細胞には複数の種類の細胞が存在する可能性が示された。このことから，ウシ卵管上皮においても非繊毛細胞から繊毛細胞への複雑な分化経路により，適切な卵管内の微小環境が提供され，卵管機能を変化させていることが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.111.0_p-40

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシ卵管上皮にみられる段階的な繊毛形成過程

伊藤さやか, 山本ゆき, 木村康二

日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   41st   2018年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ黄体細胞における LH 感受性とコラーゲンの関係

丸尾 直奈, 羽柴 一久, 渡邊 大輔, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   111   OR2-22 - OR2-22   2018年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】黄体細胞は豊富な細胞外マトリックス（ECM）に取り囲まれていることが報告されており，黄体形成や血管新生において重要な役割を果たす。黄体の主なECMはⅠ型コラーゲンであるが，コラーゲンと黄体機能の関係について明らかではない。本研究では，ウシ黄体細胞のコラーゲンを用いた培養おける黄体機能について検討した。【方法】1）ウシ中期黄体細胞を単層プレート上（単層培養），Ⅰ型コラーゲン・ゲル上（コラーゲン・ゲル上培養），Ⅰ型コラーゲン・ゲル中（コラーゲン・ゲル包埋培養）で5日間培養した。培養後，対照区および黄体形成ホルモン（LH; 10 ng/ml）添加区を作成し24時間培養した。培養後のP4産生をenzyme immunoassayにより，LH-R mRNA発現を定量的RT-PCRにより測定した。2）コラーゲンにはゲルのような三次元構造とコラーゲン・コートのような二次元構造が存在する。これらの違いによる，黄体細胞のP4産生およびLH-R mRNA発現について検討した。ウシ中期黄体細胞を単層プレート上（単層培養），Ⅰ型コラーゲン・ゲル上（コラーゲン・ゲル上培養），Ⅰ型コラーゲン・コート培養皿上（コラーゲン・コート上培養）で5日間培養した。培養後，対照区および LH 添加区を作成し 24 時間培養した。培養後のP4産生および LH-R mRNA発現を測定した。【結果と考察】1）単層培養では，LH添加によるP4産生の増加は認められたが，コラーゲン・ゲル上およびコラーゲン・ゲル包埋培養では，LH添加による P4 産生の増加は認められず，LH-R mRNAの発現量は有意に減少した。2）コラーゲン・コート上培養においてLH添加によるP4産生の増加が認められたが，コラーゲン・ゲル上培養ではLH添加によるP4産生は増加しなかった。LH-R mRNA発現は，コラーゲン・ゲル上培養と比較して，コラーゲン・コート上培養において有意に高かった。以上の結果から，ウシ黄体細胞におけるLH感受性はコラーゲンの構造によって影響を受けることが示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.111.0_or2-22

CiNii Article

researchmap

ウシ初期黄体における低酸素環境のglucose transporter 1(GLUT1)発現を介した機能亢進

西村亮, 西村亮, 長谷川啓喜, 山下真路, 伊藤典彦, 岡本芳晴, 竹内崇, 窪友瑛, 伊賀浩輔, 木村康二, 菱沼貢, 奥田潔, 奥田潔

日本獣医学会学術集会講演要旨集   160th   431 - 431   2017年8月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本獣医学会  

J-GLOBAL

researchmap

ウシ初期および中期黄体細胞のプロジェステロン(P4)分泌に及ぼす低酸素環境の影響

長谷川 啓喜, 西村 亮, 菱沼 貢, 山下 真路, 伊藤 典彦, 岡本 芳晴, 窪 友瑛, 伊賀 浩輔, 木村 康二, 奥田 潔

日本畜産学会大会講演要旨集   122回   160 - 160   2017年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(公社)日本畜産学会  

researchmap

The effect of interferon tau on human placental cells

Nao Tanikawa, Yugo Suzue, Schuichi Matsuyama, Koji Kimura, Hisataka Iwata, Takehito Kuwayama, Koumei Shirasuna

JOURNAL OF REPRODUCTIVE IMMUNOLOGY   118   134 - 134   2016年11月

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：ELSEVIER IRELAND LTD  

DOI： 10.1016/j.jri.2016.10.075

Web of Science

researchmap

農家で実施可能なウシ伸長胚を利用した雌雄産み分け技術 (特集 目指せ、確実な子牛生産)

松山 秀一, 中村 翔, 木村 康二

養牛の友   ( 488 )   34 - 37   2016年11月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：日本畜産振興会  

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

ウシ伸長胚を利用した現場実施可能な雌雄産み分け技術

松山 秀一, 中村 翔, 木村 康二

畜産技術 = Livestock technology   2016 ( 738 )   8 - 11   2016年11月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：畜産技術協会  

DOI： 10.57546/livestocktechnology.2016.738-nov._8

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

サブユニット特異的なI型インターフェロン(IFN)受容体発現抑制によるIFN-τシグナル関連遺伝子発現への影響

白水 貴大, 鈴木 惇文, 岩野 弘暉, 小木曽 貴季, 金 星佑, 唄 花子, 川原 学, 木村 康二, 高橋 昌志

日本繁殖生物学会 講演要旨集   109 ( 0 )   P - 14-P-14   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：日本繁殖生物学会  

<p>【目的】着床前のウシ子宮では，胚より分泌されるインターフェロンタウ（IFN-τ）が，IFNAR1（R1）とIFNAR2（R2）の二量体で構成されるI型IFN受容体を介したJAK/STAT経路によってIFN誘導性遺伝子（ISGs）の発現を誘導する。しかし，ウシ子宮におけるIFN-τシグナルの受容体サブユニット依存的なISGs発現調節機構は不明である。本研究では，ウシ子宮内膜上皮細胞におけるI型IFN受容体サブユニットの発現抑制がIFN-τ刺激による遺伝子発現へ及ぼす影響を検証した。【材料と方法】食肉処理場より採材したウシ子宮内膜組織由来の初代培養細胞を実験に供試した。細胞にR1またはR2のsiRNAを導入しRNA干渉した。導入24時間後のR1，R2の発現抑制効果を定量PCRで検証した。さらに，siRNA導入24時間後に組換えウシIFN-τを添加し，12および24時間後の1）抗ウイルス能（MX1，2，ISG15），2）IFNシグナル伝達制御（STAT1，2，IRF1，2，3，9），3）I型IFN受容体発現の維持（COPS5）および4）着床時の細胞増殖（TGF-β1，2）に関連する遺伝子群の発現量を定量PCRで解析した。【結果と考察】R1またはR2のsiRNA導入によるRNA干渉はR1，R2の発現をそれぞれ特異的に抑制した。R1またはR2の発現抑制はIFN-τによるMX1，2，ISG15，STAT1，2，IRF1，2，3，9，COPS5発現の誘導を有意に抑制した。特に，R2と比べてR1抑制時に高い発現抑制効果を示した。TGF-β1，2の発現については，R1，R2の発現抑制による影響は見られず，JAK/STATシグナルから直接制御されない可能性が示唆された。【結論】IFN-τのIFNARを介したJAK/STAT経路にはR1依存的なシグナル伝達機構が存在することが明らかとなった。</p>

DOI： 10.14882/jrds.109.0_P-14

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

着床前ゲノム選抜技術開発に向けたウシ伸長胚保存法の検討

藤井貴志, 平山博樹, 陰山聡一, 内藤学, 福田茂夫, 吉野仁美, 松山秀一, 木村康二, 早川宏之, 津田栄, 森安悟

Journal of Reproduction and Development   62 ( Suppl Japanese Issue )   P-101 - P-101   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】受精卵の段階でゲノム育種価推定ができれば，より効率的なゲノム育種が可能となる。近年，受精卵移植に長径数ミリから数センチに発生した伸長胚を利用する技術が開発されており，伸長胚であれば，受胎性を損なわずにSNP解析に十分な量の細胞を採取できると考えられる。一方，SNP解析が終了するまでの間伸長胚を体外で保存する必要があるが，伸長胚の保存法はない。本研究では，伸長胚保存法の基礎検討を行った。【方法】過剰排卵処理により採取した胚齢15～16日の伸長胚を以下の3つの方法で保存した。〈凍結保存〉伸長胚を1.5M Etylene Glycol（EG），0.1M Trehaloseを含む保存液と共に0.25 mlストローに封入し，10分または60分間平衡後，緩慢凍結法により凍結した。〈ガラス化保存〉7.5%EG，7.5%DMSOを含む平衡液および15%EG，15%DMSO，1.5M Sucroseを含むガラス化液に3分および1分または10分および5分浸漬後，ナイロンメッシュに乗せ，液体窒素に直接浸してガラス化した。〈非凍結保存〉伸長胚を0%，20%，50%血清および50%血清＋III型不凍タンパク質（AFP）を含むTCM-199培地と共に0.5 mlチューブに封入し，4℃の冷蔵庫内で7日間非凍結保存した。各方法で保存した伸長胚は，蛍光イメージング試薬により保存後の死細胞率を解析した。【結果】緩慢凍結保存後の死細胞率は，10分平衡区で平均1.32%，60分平衡区で平均2.48%であり，新鮮胚（平均0.96%）と比較して差はなかった。一方，ガラス化保存後の死細胞率は，平衡液3分-ガラス化液1分区で平均18.36%，平衡液10分-ガラス化液5分区で平均19.61%であり，両区とも新鮮胚と比較して有意（P<0.05）に高かった。非凍結保存後の死細胞率は，0%，20%，50%血清および50%血清＋III型AFP区で，それぞれ平均36.28%，21.58%，12.28%および14.76%であり，いずれも新鮮胚と比較して有意（P<0.01）に高かったが，血清濃度が上昇するにつれ死細胞率は減少した。以上より，現状では，緩慢凍結法が伸長胚の保存法として最も適していると考えられた。今後，保存方法の最適化と受胎率調査を行う。

DOI： 10.14882/jrds.109.0_p-101

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシ伸長胚を用いた着床前ゲノム選抜技術開発に向けたSNP解析精度の検討

平山博樹, 内藤学, 鹿島聖志, 藤井貴志, 陰山聡一, 坂井ひとみ, 杉本喜憲, 松山秀一, 木村康二, 早川宏之, 森安悟

Journal of Reproduction and Development   62 ( Suppl Japanese Issue )   2016年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ過剰排卵処置時におけるニューロキニンB受容体作動薬の末梢投与が黄体形成ホルモン分泌および回収胚の品質に及ぼす影響

中村翔, 木村康二, 美辺詩織, 大石真也, 大蔵聡, 松山秀一

Journal of Reproduction and Development   62 ( Suppl Japanese Issue )   OR2-27 - OR2-27   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】現在行われている過剰排卵処置では，回収胚の数と品質にばらつきが出るといった問題が度々生じている。また，現在の過剰排卵処置では，黄体形成ホルモン（LH）分泌の抑制が起こることが知られており，このLH分泌抑制が卵子の成熟過程に影響を及ぼし，前述した問題を引き起こすと考えられるが，その改善は未だなされていない。視床下部弓状核に局在するニューロキニンB，ダイノルフィンおよびキスペプチンが共存するKNDyニューロンとよばれるニューロン群は生殖機能の制御に重要な役割を果たすと考えられており，近年，ウシにおいてニューロキニンB受容体作動薬であるsenktideの末梢投与がLH分泌を亢進することが報告されている。そこで本研究では，ウシの過剰排卵処置時においてsenktideの末梢投与が，性腺刺激ホルモン分泌および回収胚の品質に及ぼす影響について検討を行った。【方法および結果】黒毛和種繁殖雌牛（n=12）を用い，ブタ卵胞刺激ホルモン製剤を3日間漸減投与することにより過剰排卵処置を行った。過剰排卵処置開始72時間後からニューロキニンB受容体作動薬であるsenktide（30または300 nmol/min）を静脈内に2時間投与し，投与前後におけるLHの分泌動態を調べた。また，発情後7日目に採胚を行い，回収胚の品質をIETSグレードで評価するとともに，CodeⅠまたはCodeⅡの胚盤胞期胚からRNAを抽出し，DNAマイクロアレイおよびQPCR解析を行った。過剰排卵処置牛へのsenktideの末梢投与は，LH分泌を亢進した。また，senktideの投与により回収胚に対する高品質胚の割合が増加した。さらに，胚における遺伝子発現パターンが変化し，シトクロム酸化酵素1などの代謝亢進に関与する遺伝子発現が上昇した。以上の結果から，過剰排卵処置牛へのsenktideの投与はLH分泌を亢進させるとともに，胚における代謝亢進に関与する遺伝子発現を上昇させ，胚の品質を向上させる可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.109.0_or2-27

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシの子宮機能と受胎性について—Relationship between uterine function and establishment of pregnancy in cattle

木村 康二, 松山 秀一

家畜感染症学会誌 = The journal of farm animal in infectious disease   5 ( 4 )   145 - 151   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：十和田 : 家畜感染症学会  

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

その他リンク： https://ndlsearch.ndl.go.jp/books/R000000004-I029105307

ウシ黄体退行における testosterone の役割

入江 結唯, 羽柴 一久, 木村 康二, 奥田 潔

日本繁殖生物学会 講演要旨集   109   OR2-34 - OR2-34   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】雌ウシならびにヤギにおいて黄体退行時に血中testosterone（T）濃度が一時的に上昇する。また，ヤギへのT合成阻害剤投与によってTの血中の濃度上昇を抑制すると，黄体の寿命が延長することから，Tは黄体退行に関与すると考えられている。このようにTが黄体退行に関与することが示唆されているが，そのメカニズムは明らかではない。本研究では，ウシ黄体退行機構を解明することを目的とし，発情周期を通じた黄体組織におけるTの受容体であるandrogen receptor (AR) mRNA発現の変化ならびに中期および後期黄体細胞の機能に及ぼすTの影響について検討した。【方法】食肉センターより採取した卵巣を肉眼的所見により排卵日を0日として，初期（Days 2–3），形成期（Days 5–6），中期（Days 8–12），後期（Days 15–17）および退行期（Days 19–21）に分類した。その後，各周期の黄体組織におけるAR mRNA発現量を定量的RT-PCR法により検討した。また，中期および後期黄体から単離した黄体細胞を一晩培養後，T（10，100および1000 pg/ml）を添加し，24および48時間後の上清中progesterone（P4）濃度をenzyme immunoassay（EIA）により，細胞生存率をMTT assayにより測定した。【結果および考察】発情周期を通じた黄体組織におけるAR mRNA発現量は，初期および形成期と比較して後期において有意に高かった（P<0.05）。中期および後期黄体細胞における24および48時間培養上清中P4濃度においてTの影響は認められなかった。また，中期黄体細胞における細胞生存率は，いずれの培養時間においてもTの影響は認められなかった。一方，後期黄体細胞における細胞生存率は，24時間培養した実験区ではTによる影響は認められなかったが，48時間において無添加区と比較して，T添加区（100および1000 pg/ml）において有意に減少した（P<0.05）。本研究より，黄体退行時に上昇する血中Tは後期黄体に作用し黄体細胞の生存性を減少させることが明らかとなり，Tが構造的黄体退行に関与する可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.109.0_or2-34

CiNii Article

researchmap

ウシ黄体維持機構におけるepidermal growth factor receptorのcore fucosylationの役割

羽柴 一久, 小林 純子, 佐野 栄宏, 前田 恵, 木村 吉伸, 奥田 潔, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   109   OR2-33 - OR2-33   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】Epidermal growth factor receptor（EGFR）に結合するN型糖鎖上のcore fucoseは，epidermal growth factor（EGF）のEGFRへの結合に重要である。EGFは黄体細胞の生存を維持し，EGFRへの結合親和性は機能黄体において高いことから，黄体においてもEGFRの黄体維持作用にcore fucosylationの関与が考えられる。本研究では，1） 発情周期を通じたウシ黄体のcore fucosylationレベルとfucose含有糖タンパク質の局在，2） 黄体細胞のEGFR糖鎖のcore fucosylationの有無，3） EGFの黄体機能維持作用に及ぼすcore fucosylationの影響を検討した。【方法】1） 発情周期を通じた黄体（初期：Days 2–3，形成期：Days 5–6，中期Days 8–12，後期：Days 15–17，退行期：Days 19–21）の膜画分のcore fucosylationレベルをfucoseを認識するAALレクチンを用いて検討し，fucose含有糖タンパク質の局在を解析した。2） 中期黄体細胞から免疫沈降法によりEGFRタンパク質を回収後，core fucosylationの有無を調べた。3） 中期黄体細胞にα-fucosidase（0.01，0.1 units/ml）を添加してcore fucoseを切断し，16時間後のcore fucosylationレベル，上清中のprogesterone（P4）濃度と生存率を検討した。黄体細胞にα-fucosidase（0.1 units/ml）とEGF（5，10 ng/ml）を単独又は組み合わせて添加し，24時間後のP4濃度と生存率を調べた。【結果】1） 黄体の糖タンパク質のcore fucosylationレベルは後期，退行期と比較して，初期，形成期と中期に高く，fucose含有糖タンパク質は黄体細胞に局在した。2） 黄体細胞のEGFR糖鎖はcore fucosylationを受けていた。3） 黄体細胞の糖タンパク質のcore fucosylationレベルと生存率は，α-fucosidase添加区において減少し，P4産生に変化はなかった。EGFによる生存率の増加は，α-fucosidaseの共添加により減少し，P4産生に変化はなかった。以上より，EGFの黄体機能維持作用にEGFRのcore fucosylationが重要であり，core fucosylationの低下が黄体の構造的退行に関与する可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.109.0_or2-33

CiNii Article

researchmap

ウシ子宮内膜細胞における黄体退行制御メカニズムに及ぼす暑熱ストレス (HS) の影響

酒井 駿介, 八木 まみ, 久世 真理子, 山本 ゆき, 木村 康二, 奥田 潔

日本繁殖生物学会 講演要旨集   109   OR1-2 - OR1-2   2016年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】世界的な地球温暖化に伴い，夏季のウシ受胎率の低下が問題視されており，その一因として夏季のHSがウシの発情周期に影響を及ぼすことが報告されている。発情発現には黄体の存在が密接に関与しており，黄体は子宮内膜から分泌されるPGF2 alpha（PGF） により黄体退行が誘導され，PGE2により維持される。子宮内膜による黄体退行制御のためのPGs産生はoxytocin（OT） およびTNF alpha（TNF）によって調節されるが，この黄体退行制御メカニズムに対するHSの影響は不明である。本研究はHSによる発情周期の乱れの一因を明らかにするために，黄体退行を制御する子宮内分泌機能に及ぼすHSの影響を検討した。【方法】培養ウシ子宮内膜上皮細胞にOT，間質細胞にTNFを添加し，40.5°Cで10時間，38.5°Cで14時間，最後に40.5°Cで10時間培養した。1） 培養上清中のPGE2およびPGF濃度をEIA，2） 間質細胞のPG合成酵素およびTNF受容体mRNA発現を定量的RT-PCR法により測定した。【結果】1） 上皮細胞のPGE2およびPGF産生はOTにより増加したが，HSによる影響は見られなかった。一方，間質細胞においてPGE2およびPGF産生はTNFにより増加し，HS処理によりさらに増加した。また，0.6 nMのTNFを添加した間質細胞においてPGE2/PGF比はHS処理により有意に増加した。2） TNF添加によりCOX2 mRNA発現は有意に増加し，PLA2およびPGES mRNA発現は増加傾向が見られた（P=0.08，0.06）。HS処理によりPLA2，PGESおよびTNFR-1 mRNA発現は有意に増加し，COX2 mRNA発現は増加傾向が見られた（P=0.09）。さらにPGES mRNA発現はTNFとHSの同時処理によってさらに増加した。また，TNFおよびHSによるPGFS，CBR1およびTNFR-2 mRNA発現の変化は見られなかった。以上のことからHSによる発情周期の変化は黄体退行時の間質細胞における内分泌機能の変化が関与する可能性が示された。HSによるPGES mRNA発現増加によるPGE2/PGF産生比の増加が黄体制御メカニズムに影響したことが原因だと考えられる。

DOI： 10.14882/jrds.109.0_or1-2

CiNii Article

researchmap

ウシ胚におけるインターフェロンτの局在

細江実佐, 林憲悟, 作本亮介, 古澤軌, 池田光美, 大越勝広, 徳永智之, 木村康二, 松山秀一, 野口純子, 高橋透

日本畜産学会大会講演要旨   119th   204   2015年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語  

J-GLOBAL

researchmap

ウシ過剰排卵処置時におけるウシ型キスペプチン‐10の静脈内への頻回投与が性腺刺激ホルモン分泌および排卵成績に及ぼす影響

松山秀一, 大蔵聡, 大石真也, 木村康二

日本はい移植学雑誌   37 ( 1 )   34   2015年1月

　詳細を見る

記述言語：日本語  

J-GLOBAL

researchmap

ウシ黄体におけるtestosterone合成酵素の遺伝子発現

入江結唯, 羽柴一久, 吉岡伸, 木村康二, 山本ゆき, 奥田潔

Journal of Reproduction and Development   61 ( Suppl Japanese Issue )   P-36 - P-36   2015年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】雌ウシにおいてtestosterone (T）は卵巣から分泌され，黄体退行時に血中T濃度の一時的な増加が認められる。さらに，黄体においてTが産生され，培養黄体細胞においてTがprogesterone (P4）分泌を低下させることから，Tが黄体において局所機能調節因子として働くことが考えられている。また，Tは2つの経路によって合成される（pregnenolone (PREG）→P4→TとPREG→dehydroepiandrosterone (DHEA）→T）。しかし，黄体中のT合成とその調節メカニズムは明らかでない。本研究では，ウシ黄体退行機構を解明するために，発情周期を通じた黄体とprostaglandin F2α （PGF）の投与により黄体退行を誘導した黄体中のPREG→DHEA→T経路を介したT合成に関与するcholesterol side-chain cleavage enzyme （P450scc），cytochrome P450 （CYP17A1）およびhydroxysteroid dehydrogenases （HSD17B1, HSD3B）mRNA発現の変化について調べた。【方法】卵巣を排卵日を0日として，初期（Days 2–3），形成期（Days 5–6），中期（Days 8–12），後期（Days 15–17）および退行期（Days 19–21）に分類した。また，中期黄体を有するウシにPGFを投与し，0，4，12および24 h後の黄体を回収した。その後，黄体中P450scc，CYP17A1，HSD17B1およびHSD3B mRNA発現量を定量的RT-PCR法により検討した。【結果】発情周期を通じた黄体中HSD3B mRNA発現量は後期と比較して退行期に低かったが，P450scc，CYP17A1およびHSD17B1 mRNA発現量に変化は認められなかった。PGF投与後の黄体中P450scc mRNA発現量は，0 hと比較してPGF投与後4と12 hで有意に減少した。HSD3B mRNA発現量は12と24 hで有意に減少したが，CYP17A1とHSD17B1 mRNA発現量に変化は認められなかった。本研究において，PREG→DHEA→T経路はウシ黄体退行期におけるT合成に関与しないことが示唆された。今後，PREG→P4→T経路の黄体退行への関与を検討する。

DOI： 10.14882/jrds.108.0_p-36

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシ卵管における細胞模型エストロジェン受容体(GPER)を介したestradiol-17β(E₂)の作用

西江拓海, 小林芳彦, 山本ゆき, 木村康二, 奥田潔, 奥田潔

日本畜産学会大会講演要旨   119th   2015年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウマ子宮内膜におけるglucocorticoid receptor, 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type1 および type 2 発現の周期的変化

塩谷 陽紀, SZOSTEK Anna Z, 山本 ゆき, 木村 康二, 奥田 潔

日本繁殖生物学会 講演要旨集   108   P-62 - P-62   2015年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】ウマにおいて子宮由来の prostaglandins （PGs）は発情周期の調節や妊娠の成立に重要だが，その合成調節機構には不明な点が多い。ラットやウシにおいて，活性型 glucocorticoid （GC）の cortisol （Cr）は黄体退行を誘導する子宮内膜からの PGF2α 産生を抑制する。我々は GC 活性化酵素の 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type1 （11β-HSD1）がウシ子宮内膜に発現し局所的に子宮の PGs 合成能を調節する可能性を示してきた。本研究では発情周期のウマにおける子宮機能調節への GC の関与を明らかにする目的で，子宮内膜組織の GC receptor （GCR）, 11β-HSD1 および GC 不活性化酵素の 11β-HSD type2 （11β-HSD2）発現の周期的変化を検討した。【方法】屠畜場で採取したウマ子宮内膜組織を卵巣の肉眼的所見から黄体初期，黄体中期，黄体後期および卵胞期の4グループに分類し，GCR, 11β-HSD1 および 11β-HSD2 の遺伝子およびタンパク質発現をそれぞれ 定量的 RT-PCR 法および western blot 法を用いて解析した。【結果および考察】子宮内膜組織における各遺伝子発現に周期的な変化はなかったが，GCR タンパク質発現は黄体中期に比べ黄体後期の方が有意に高かったことから，黄体後期では Cr に対する感受性が高いことが示唆された。また，11β-HSD2 タンパク質発現は卵胞期に比べ黄体中期で高かったことから，ウマ子宮内膜では黄体中期で Cr から不活性型 GC の cortison へ活発に転換されている可能性が示された。以上の結果より，循環血液から供給される GC は，発情周期中のウマ子宮内膜において局所的にその活性が制御され，子宮機能調節に関与することが推察された。現在，PGs 合成も含め GC が子宮内膜の機能に与える影響を検討中である。

DOI： 10.14882/jrds.108.0_p-62

CiNii Article

researchmap

piggyBac トランスホソンを用いたリフログラミンク因子導入によるウシ羊膜細胞からの栄養膜細胞株樹立の試み

川口 高正, 築山 智之, 松山 秀一, 木村 康二, 南 直治郎, 山田 雅保, 今井 裕

第107回日本繁殖生物学会大会   107   P-20 - P-20   2014年8月

　詳細を見る

記述言語：日本語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（全国大会，その他学術会議）   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】栄養膜細胞は胚発生で起こる最初の細胞分化により作り出される細胞であり，着床や胎盤形成に重要な役割を担っている。マウスやヒトでは着床初期の研究は盛んに行われているが，ウシでは胚発生および着床・妊娠プロセスは大きく異なっていることもあり，未だ不明瞭な部分も多い。さらに，ウシではこれらの研究を進める上で有用と思われる，栄養膜幹細胞株の報告はなく，それから派生する細胞系譜の細胞株の種類も少ない。本研究では，ウシの羊膜細胞から人工栄養膜細胞(induced trophoblast cells; iTB細胞)の樹立を試みた。【方法】妊娠50日齢の胎仔から採取した羊膜細胞に，Oct3/4，Sox2，Klf4およびc−Mycの転写因子を，piggyBacトランスポゾンベクターを用いて導入した。このベクターには，ドキシサイクリン（Dox）添加の有無によって，導入した転写因子の発現が制御できるシステムを組み込んだ。Doxの添加から4日後，遺伝子導入後の細胞をフィーダー細胞上へと移し，10%のFBSを含む培地で培養を行った。【結果】Doxの添加から2週間後，上皮細胞様で敷石状の形態を示すコロニーが出現した。このコロニーは，その細胞形態を維持したまま40回以上継代を行うことができた。得られた細胞株は，幹細胞マーカーであるアルカリフォスファターゼ活性を部分的に示していた。また，栄養膜細胞関連遺伝子（CDX2，ESRRβ，IFNτ）を発現していた。さらに，低接着ディッシュ上で数日間浮遊培養し，分化を促すと栄養膜小胞(Trophoblastic vesicle)様の胞状球体および二核細胞の形成が認められた。これらの結果から，羊膜細胞にリプログラミング因子を発現させることにより，人工的に栄養膜細胞株を得ることが可能になった。得られた細胞株は，ウシの着床・妊娠プロセスにおける栄養膜細胞の機能や細胞分化の研究のための有用なツールとなると考えられる。

DOI： 10.14882/jrds.107.0_p-20

CiNii Article

researchmap

インターフェロン(IFN)τはナノ粒子の取り込みを阻害してインターロイキン(IL)-1β産生を抑制する

原 教子, 白砂 孔明, 臼井 文武, 唐澤 直義, 木村 博昭, 川島 晃, 大口 昭英, 松山 秀一, 木村 康二, 高橋 将文

The Journal of Reproduction and Development   60 ( Suppl. )   j137 - j137   2014年8月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：(一社)日本繁殖生物学会  

【目的】IFNα（IFNA）やIFNβ（IFNB）を含むⅠ型IFNは自己免疫疾患などの治療薬として期待されている。近年，自己免疫疾患などの無菌性炎症においてインフラマソームの役割が注目されている。NLRP3インフラマソームが関与する多発性硬化症のマウスモデルでは，IFNB投与により病態が軽減される。しかし，Ⅰ型IFNは副作用や細胞毒性が高く，臨床使用は制限されている。一方，反芻動物の胚栄養膜細胞から分泌されるIFNτ（IFNT）は，他のⅠ型IFNと同様の免疫調節作用を有し，細胞毒性が低い。本研究はヒト単球細胞（THP-1）を用い，NLRP3インフラマソームを介したIL-1β分泌におよぼすIFNTの影響を検証した。【方法と結果】1）THP-1にNLRP3インフラマソーム活性化因子であるナノ粒子を添加するとIL-1β産生が増加し，IFNT処置により抑制された。また，IFNTはISG15（IFN応答因子）遺伝子発現を刺激したが，インフラマソーム関連遺伝子には変化がなかった。一方，IFNTはIL-10分泌を促進した。2）活性酸素種はNLRP3インフラマソーム活性化に重要である。THP-1にナノ粒子を添加すると活性酸素種産生が増加したが，IFNT処置により抑制された。3）蛍光物質結合型のナノ粒子をTHP-1に添加すると，細胞内への取り込みが増加したが，IFNT処置では抑制された。また，IFNT処置によりナノ粒子の取り込みに関与するMARCO（スカベンジャー受容体）の遺伝子発現が低下した。4）異物を取り込む際に重要なアクチン形成を解析するためにTHP-1に蛍光ファロイジン染色を行うと，ナノ粒子誘導性のアクチン重合の増加がIFNT処置により抑制された。以上から，THP-1においてIFNTはナノ粒子誘導性のNLRP3インフラマソーム性化を制御することでIL-1βを低減することが示された。この抑制機構には，IFNTによるナノ粒子の取り込みと活性酸素種産生の低下，IL-10産生の増加が関与すると考えられた。

DOI： 10.14882/jrds.107.0_p-76

CiNii Article

researchmap

ウシ子宮内膜組織におけるMX1とMX1B発現に及ぼすI型インターフェロンの応答性およびその受容体の発情周期別比較

白水 貴大, 川原 学, 木村 康二, 高橋 ひとみ, 柳川 洋二郎, 永野 昌志, 白 汝嵐, 今川 和彦, 高橋 昌志

日本繁殖生物学会 講演要旨集   107 ( 0 )   OR2 - 24-OR2-24   2014年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：日本繁殖生物学会  

【目的】ウシMX1はI型インターフェロン(IFN)-α/β誘導性遺伝子であり，MX1Bというスプライシング変異体が存在する。我々は第2回北海道畜産草地学会において，子宮組織におけるMX1とMX1B mRNAが妊娠中期と比べて妊娠初期で有意に高い発現を示すことを報告した。このことから，MX1とMX1Bの発現には，妊娠認識時にのみ胚より産生されるIFN-τが深く関わることが示唆された。IFN-τはI型IFNに属するが，IFN-α/βとは異なる一過性の産生パターンを示す。本研究では，MX1とMX1BのI型IFN応答性差異の有無を明らかにする目的で，ウシ子宮組織培養系を用いてIFN-τまたはIFN-αによるMX1とMX1B mRNAの発現応答を比較し検証した。さらに，発情周期の違いによる両遺伝子のIFN応答性の差異について，I型IFN受容体発現と併せて検証した。【材料と方法】黄体所見をもとに前期，中期，後期に分けた食肉処理場由来のウシ非妊娠子宮から内膜組織を採取した。これらの組織小片を1時間前培養後，抗ウイルス活性を合わせたIFN-τを含む濃縮妊娠子宮灌流液(D18)またはウシ組換えIFN-α添加で培養し，12および24時間後のMX1とMX1B mRNAの発現量を定量PCRで調べた。また，採取直後の子宮組織におけるI型IFN受容体IFNAR1とIFNAR2の発現量も定量PCRで調べた。【結果と考察】子宮灌流液(D18)またはIFN-α添加によってMX1とMX1Bともに発現が誘導され，MX1Bに対しMX1が有意に高い発現量を示したが，両添加区間で応答性に差はみられなかった。発情周期別で比較した結果，12時間培養後のMX1とMX1Bの発現量ならびに採取直後の子宮組織でのIFNAR1とIFNAR2の発現量は後期で低い傾向がみられた。以上より，発情周期の違いで子宮内膜におけるI型IFN受容体の発現量が変化し，それに伴いI型IFNによるMX1とMX1Bの発現応答性に差異が生じる可能性が示唆された。

DOI： 10.14882/jrds.107.0_OR2-24

CiNii Article

J-GLOBAL

researchmap

ウシ子宮内膜上皮細胞におけるSide populationの遺伝子発現解析

松山 秀一, 古澤 軌, 池田 光美, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   107   P-69 - P-69   2014年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】ヒトの子宮内膜は，エストロジェンやプロジェステロンの支配を受けて月経周期ごとに脱落と増殖を繰り返し，絶えず更新される。さらに，子宮に存在する組織幹細胞（子宮内膜幹細胞）が子宮内膜の更新に寄与することが示唆されているが，ヒトとは異なる子宮内膜更新メカニズムを有するウシにおいては，子宮における幹細胞の存在について未だ明らかでない。本研究では，ウシの子宮内膜更新メカニズムを明らかにする第一歩として，ウシ子宮における組織幹細胞の存在を明らかにすることを目的とした。【方法および結果】未経産牛の子宮からトリプシン処理により単離し，培養した子宮内膜上皮細胞を用いてHoechst33342にて染色後，フローサイトメトリー解析に供した。その結果，ウシ子宮内膜上皮培養細胞には蛍光強度の低い領域に突出した細胞集団が存在し，この細胞集団はATP binding cassette（ABC）トランスポーターの阻害剤であるベラパミル存在下で消失した。このことから，ヒト等において幹細胞活性を有すると報告されているSide population (SP) 細胞がウシの子宮内膜上皮細胞においても存在することが明らかとなった。さらにセルソーターによって，ウシの子宮内膜上皮培養細胞からSP細胞とそれ以外の細胞（Major population, MP細胞）を分取し，それぞれの細胞における遺伝子発現についてDNAマイクロアレイ法により解析した。その結果，ウシ子宮内膜上皮細胞におけるSP細胞では組織・上皮増殖や細胞接着，免疫機能に関わる遺伝子の発現量が高いことが明らかとなった。

DOI： 10.14882/jrds.107.0_p-69

CiNii Article

researchmap

Generation of murine-ES-cell-like iPS cells in cattle using piggyBac transposition of doxycycline-inducible transcription factor 査読

T. Kawaguchi, T. Tsukiyama, N. Minami, M. Yamada, K. Kimura, H. Imai

CiRA International Symposium 2013 ~Raising the next generation of stem cell research~, Kyoto, Japan   2013年3月

　詳細を見る

記述言語：英語  

researchmap

ウシにおけるマウスES細胞様iPS細胞の樹立の試み 査読

川口 高正, 南 直治郎, 山田 雅保, 木村 康二, 今井 裕

第1回 関西生殖医学集談会   2013年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語  

researchmap

ウシ過剰排卵処置時におけるウシ型キスペプチン‐10の単回末梢投与が性腺刺激ホルモン分泌および卵巣機能に及ぼす影響

松山秀一, 大蔵聡, 大石真也, 木村康二

東日本家畜受精卵移植技術研究会大会資料   29th   39   2013年

　詳細を見る

記述言語：日本語  

J-GLOBAL

researchmap

Transdifferentiation of bovine aminion cells into trophoblast-like cells using piggyBac transposition of doxycycline-inducible reprogramming factors 査読

T. Kawaguchi, T. Tsukiyama, N. Minami, M. Yamada, K. Kimura, H. Imai

Satellite symposium to the International Congress on Animal Reproduction (ICAR)   2012年7月

　詳細を見る

記述言語：英語  

researchmap

ウシの月齢が顆粒層細胞のグルタチオン含量とp38 MAPKのリン酸化に及ぼす影響

竹尾 駿, 後藤 大也, 木村 康二, 岩田 尚孝, 門司 恭典, 桑山 岳人

Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌   29 ( 2 )   S60   2012年4月

　詳細を見る

記述言語：日本語  

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

Sexual dimorphism during early embryonic development in mammals

Koji Kimura, Shuichi Matsuyama

Journal of Mammalian Ova Research   29 ( 3 )   103 - 112   2012年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：書評論文，書評，文献紹介等  

Although most sexual dimorphism appears after gonadal differentiation, some occur at earlier stages of development. One example of this phenomenon is the skewing of the sex ratio of embryos due to the glucose concentration of the culture medium. This skewing occurs because male and female embryos differ in their abilities to metabolize glucose. Another example is the sexually dimorphic expression of the bovine embryo-derived signal for maternal recognition of pregnancy, IFNT. The difference in expression of X-linked genes between male and female embryos, that results from incomplete X-chromosome inactivation, is considered to be involved, either directly or indirectly, in the sexual dimorphism that appears during early development. © 2012 Japanese Society of Mammalian Ova Research.

DOI： 10.1274/jmor.29.103

Scopus

researchmap

CHANGES IN PLASMA STEROID CONCENTRATIONS DURING GESTATION IN COWS WITH SPONTANEOUS ABORTION OF SOMATIC CELL CLONED FETUSES

M. Hirako, H. Takahashi, K. Kimura, N. Adachi, S. Akagi

REPRODUCTION FERTILITY AND DEVELOPMENT   24 ( 1 )   121 - 121   2012年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：CSIRO PUBLISHING  

Web of Science

researchmap

Oog1 promoter controls the meiosis-specific gene expression in germ cells 査読

Ishida M, Okazaki E, Tsukamoto S, Kimura K, Ohota Y, Kito S, Imai H, Minami N

The 45th Annual Meeting of the Society for the Study of Reproduction   2012年

　詳細を見る

記述言語：英語  

researchmap

Establishment of induced pluripotent stem cells in cattle using piggyBac transposition of doxycycline-inducible transcription factors

T. Kawaguchi, T. Tsukiyama, K. Kimura, N. Minami, M. Yamada, H. Imai

World Congress on Reproductive Biology (WCRB), Cairns, Australia   2011年10月

　詳細を見る

記述言語：英語  

researchmap

Identification of Oog1 Promoter Regions in Mouse Growing Oocytes

Miya Ishida, Eriko Okazaki, Satoshi Tsukamoto, Koji Kimura, Yuki Ohta, Seiji Kito, Hiroshi Imai, Naojiro Minami

BIOLOGY OF REPRODUCTION   85   2011年7月

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

ウシ妊娠認識時に起きる黄体内でのリンパ管新生に対するIFN-τ関与の可能性

新田 あかね, 白砂 孔明, 羽田 真悟, 松井 基純, 清水 隆, 松山 秀一, 木村 康二, HEINRICH Bollwein, 宮本 明夫

日本繁殖生物学会 講演要旨集   85   225 - 225   2011年7月

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】黄体はプロジェステロンを産生することで妊娠成立・維持に重要な役割を果たす。様々な免疫細胞を含む黄体では免疫応答が起こりうるが，免疫応答にはリンパ管が必須である。また妊娠認識時に胚が産生するインターフェロン(IFN)- τは子宮だけでなく黄体や免疫細胞を含む全身系で作用することがわかってきた。本研究では，「IFN-τが妊娠黄体移行に向けた黄体機能を調節する」という仮説のもと，ウシ黄体におけるリンパ管の存在，妊娠黄体におけるリンパ管の変化とIFN-τのリンパ管内皮細胞に対する作用を調べた。<BR>
【方法】1)食肉処理場由来ウシ黄体の凍結切片を作製し，リンパ管内皮細胞の指標であるLYVE1と血管内皮細胞の指標であるvWF の免疫組織化学染色を行った。2)発情周期 Day 16(C16)，妊娠Day 16(P16)とDay40(P40)のウシ黄体を採取し(n=5-7/区)，LYVE1，リンパ管新生因子VEGFCとその受容体VEGFR3の遺伝子発現とLYVE1タンパク質発現を調べた。3)ウシ内腸骨リンパ管から単離したリンパ管内皮細胞(LyEC)の細胞培養を行い，IFN-τまたはIFN-α添加4時間後のリンパ管関連因子の遺伝子発現を調べ，IFN-τ添加区では細胞増殖率と管腔形成度を調べた(n=3-5)。<BR>
【結果】1)vWFと異なる部位でLYVE1が染色された。2)LYVE1 ，VEGFCとVEGFR3 mRNA発現はC16に比べP16もしくはP40で増加し，LYVE1タンパク質発現はP40で増加した。3)IFN-τはLyECのVEGFC mRNA発現を刺激したが，IFN-αは抑制する傾向があった。またIFN-τはLyECの細胞増殖及び管腔形成を促進した。以上から，ウシ黄体にリンパ管が存在し，妊娠黄体への移行期にリンパ管システムの変化が起きはじめ，IFN-τがウシ黄体内のリンパ管新生を調節する可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.104.0.225.0

Web of Science

CiNii Article

researchmap

ウシにおける人工多能性幹細胞の樹立の試み

川口 高正, 築山 智之, 木村 康二, 南 直治郎, 山田 雅保, 今井 裕

第136回 日本生殖医学会関西支部集談会、ハービスプラザ、大阪   2011年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語  

researchmap

過剰排卵処置牛における血中プロジェステロン濃度と胚数および胚伸長との関係

松山 秀一, 坂口 陽祐, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   104   1075 - 1075   2011年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

ウシやヒツジでは、人工授精において妊娠初期、特に発情後5日目の血中プロジェステロン濃度が、その後の胚成長および生存に影響を及ぼすことが示唆されている。ところが、過剰排卵処置牛においては、複数の黄体が形成されるため血中プロジェステロン濃度が著しく高まる一方で、子宮内に存在する胚の数は非常に多く、その血中プロジェステロン濃度と胚伸長との関係については明らかでない。本研究では、過剰排卵処置牛における高濃度の血中プロジェステロンが胚の伸長に及ぼす影響について明らかにするため、過剰排卵処置牛の血中プロジェステロン濃度と発情後13日目または14日目に回収した胚の数およびその長径との関係について検討した。黒毛和種を用いて、黄体期中期に過剰排卵処置を行い、さらにPGF_2α類似体の投与により発情を誘起した。発情確認日（Day 0）の夕方と翌日の朝に人工授精を行い、Day 13またはDay 14に非外科的に胚を回収し、回収胚数およびその長径を測定した。また、経時的に採血し、血中プロジェステロン濃度を測定した。Day 13およびDay 14で回収した胚の長径は、それぞれDay 5における血中プロジェステロン濃度が30-40 ng/mlおよび20-30 ng/mlまではプロジェステロン濃度が高いほど大きくなる一方で、それ以上の濃度になると胚の長径が小さくなる傾向が見られた。また、回収胚数とその長径との関係についても、Day 13およびDay 14に回収した胚の数が、それぞれ11-15個および6-10個までは回収胚数が多いほど胚の長径が大きくなる一方で、それ以上になると胚の長径が小さくなる傾向が見られた。以上の結果から、過剰排卵処置牛においても高濃度の血中プロジェステロンが胚伸長に促進的に働くことが示唆されただけでなく、子宮内に多数の胚が存在する場合には、栄養素の競合が起こるために胚伸長が抑制される可能性が考えられた。

DOI： 10.14882/jrds.104.0.1075.0

CiNii Article

researchmap

マウス卵母細胞特異的遺伝子Oog1のプロモーター解析

石田 未弥, 岡崎 永里子, 塚本 智史, 木村 康二, 太田 有紀, 鬼頭 靖司, 今井 裕, 南 直治郎

日本繁殖生物学会 講演要旨集   104   1004 - 1004   2011年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】組織特異的プロモーターは遺伝子解析における有用なツールである。卵母細胞特異的プロモーターとしてはZp3およびGdf9プロモーターが成長期の卵母細胞で報告されているが、胎子卵巣内卵母細胞(シスト内卵母細胞)および原始卵胞内卵母細胞における特異的な活性を示すプロモーターは未だ報告されていない。本研究においては、卵母細胞において胎齢15.5日から特異的に発現する遺伝子Oog1の上流領域から胎子卵巣内卵母細胞中で転写活性を持つプロモーター配列の同定を目的とした。【方法】ゲノム上に存在する5コピーのOog1遺伝子の上流配列から長さの異なる2種類のプロモーター候補配列（2.7 kb,および3.9 kb）を単離した。これらの候補配列の下流にGFP遺伝子を組み込んだ遺伝子組換えマウスを作製し、卵母細胞におけるGFPの発現解析に基づくプロモーター活性の評価を行った。【結果】2種類の配列を用いた遺伝子組換えマウスの成体卵巣の凍結切片を作製し、GFPシグナルを観察した結果、2.7 kbの配列を用いた組換えマウス系統ではGFPのシグナルは2次卵胞以降の卵胞内卵母細胞で検出された。一方3.9 kbの配列を用いた系統においては１次卵胞以降の卵胞内卵母細胞でシグナルが検出され、2.7 kbの配列を用いた場合よりも強いプロモーター活性が観察された。また、卵巣のRT-PCRの結果、2種類の候補領域は共に胎齢15.5日の胎子卵巣でGFP mRNAの発現を誘導することが明らかとなった。3.9 kbプロモーターには2つのNobox Binding Elementが存在するため、これによってプロモーター活性が増強した可能性が考えられる。本研究によって明らかとなったOog1のプロモーター領域は胎子卵巣内卵母細胞において転写活性を示し、早期に発現を開始する卵母細胞特異的遺伝子の機能解析に有用である。また、その発現制御機構のさらなる解析によって生殖細胞特異的遺伝子の発現調節機構の解明に新たな知見をもたらすものと考えられる。

DOI： 10.14882/jrds.104.0.1004.0

CiNii Article

researchmap

Identification of Oog1 Promoter Regions which Function During the First Meiosis in Oocytes. 査読

Eriko Okazaki, Satoshi Tsukamoto, Koji Kimura, Yuki Ohta, Seiji Kito, Hiroshi Imai, Naojiro Minami

BIOLOGY OF REPRODUCTION   170 - 170   2010年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

The Relationship Between Pregnancy Status and Production of IFN-Tau of Bovine Conceptus by Measuring Expression of Interferon- Stimulated Gene 15 (ISG15) of Peripheral Leukocyte in Cattle

Shuichi Matsuyama, Takatoshi Kojima, Satoshi Kato, Shogo Shiratsuki, Hiroshi Tanaka, Keiichi Nagataki, Shoichi Hoshi, Koichi Muroi, Koji Kimura

BIOLOGY OF REPRODUCTION   152 - 152   2010年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

RELATIONSHIP BETWEEN FETAL ABNORMALITIES AND PERIPHERAL STEROID CONCENTRATIONS DURING GESTATION IN COWS TRANSFERRED WITH EMBRYOS PRODUCED BY SOMATIC CELL NUCLEAR TRANSFER

M. Hirako, H. Takahashi, K. Kimura, N. Adachi, S. Akagi

REPRODUCTION FERTILITY AND DEVELOPMENT   22 ( 1 )   187 - 187   2010年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：CSIRO PUBLISHING  

Web of Science

researchmap

ウシ卵巣の黄体の有無と卵管上皮細胞の精子貯蔵能およびプロジェステロン濃度の関係

坂口 陽祐, 大村 麻奈美, 松山 秀一, 岩田 尚孝, 木村 康二, 門司 泰典, 桑山 岳人

日本繁殖生物学会 講演要旨集   103   121 - 121   2010年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】ウシにおいて、卵管上皮細胞には精子を排卵時まで貯蔵するという重要な役割がある。しかし卵管上皮細胞は発情周期によりその形態や機能が変化することが知られているが、精子貯蔵機能の変化は明らかとされていない。そこで本実験では、異なる発情周期にあるウシの卵管上皮細胞を用いて、精子貯蔵能と卵管に含まれるプロジェステロン濃度の関係を検討した。【方法】機能黄体を有し優勢卵胞（> 10mm）の無い卵巣より採取した卵管対を黄体区、退行黄体・グラーフ卵胞（> 20mm）を有した卵管対を卵胞区とした。それぞれの卵管対より上皮細胞を採取し、精子と5分間共培養後、遠心分離により卵管上皮細胞接着精子を分離し、その接着率を観察した。卵管上皮細胞と共培養を行わない精子（コントロール）と卵管上皮細胞接着精子をそれぞれ0、3、5時間培養後、生存性・運動性・先体反応誘起率を観察した。0時間を基準とし、各時間の維持率を算出した。またこれら卵管自体に含まれるプロジェステロン濃度を測定した。【結果】共培養直後の卵管上皮細胞への精子接着率は、卵胞区において有意に高い値を示した。5時間培養後において、コントロール・黄体区と比較し、卵胞区で有意に高い精子生存性と低い先体反応誘起率が観察された。精子運動性においては、3、5時間培養後に同様に卵胞区で高い維持率が観察された。また各区の卵管対の間には差は観られなかった。プロジェステロン濃度においては、卵胞区と比較し黄体区の方が有意に高く、また黄体区の黄体を有した卵巣側卵管はその対と比較して有意に高かった。これらより発情周期による機能黄体の有無は、卵管のプロジェステロン濃度と精子貯蔵能と大きく関わっている可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.103.0.121.0

CiNii Article

researchmap

Renewal of techniques related to embryo transfer in cattle : a novel superovulation method using aluminum hydroxide gel

KIMURA Koji, MATSUYAMA Shuichi, IWATA Hisataka, SEKI Makoto, HIRAKO Makoto

The Journal of reproduction and development   55   j60 - j61   2009年8月

　詳細を見る

記述言語：英語  

CiNii Article

researchmap

ZP3 promoter is not enough to analyze the early expressing genes during oogenesis, such as Oog1 Analysis of Oog1, an oocyte-specific gene, using transgenic RNAi approach. 査読

Imaichi H, Okazaki E, Tsukamoto S, Ohota Y, Kito S, Kimura K, Imai H, Minami N

42nd Society for the Study of Reproduction   2009年

　詳細を見る

記述言語：英語  

researchmap

ZP3 Promoter Is Not Enough to Analyze the Early Expressing Genes During Oogenesis, Such as Oog1

Hisashi Imaichi, Rieko Okazaki, Satoshi Tsukamoto, Yuki Ohta, Seiji Kito, Koji Kimura, Hiroshi Imai, Naojiro Minami

BIOLOGY OF REPRODUCTION   128 - 128   2009年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

ウシにおけるIFN-tau分泌動態と受胎との関係解明

松山 秀一, 小島 孝敏, 加藤 聡, 白築 章吾, 田中 裕, 永瀧 圭一, 星 昭一, 室井 浩一, 木村 康二

日本繁殖生物学会 講演要旨集   102   1086 - 1086   2009年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】ウシにおいて胚から分泌されるインターフェロン・タウ（IFN-tau）が妊娠維持に関与することが示されているが、妊娠早期におけるIFN-tau分泌動態と受胎性との直接的な因果関係は未解明のままである。近年、子宮内のIFN-tauが血液中に混入し、末梢白血球中に存在するインターフェロン誘導性遺伝子15（ISG15）の発現を直接刺激する可能性が示された。そこで本研究では、子宮内におけるIFN-tau投与量と末梢白血球中ISG15の発現量との関係について検討し（実験１）、人工授精後の末梢白血球中ISG15の発現量を測定する（実験２）ことで、妊娠認識時期におけるIFN-tau分泌動態と受胎性との直接的な因果関係を解明することを目的とした。【方法】実験1：肉用牛を用い、発情後16-17日目にIFN-tauの子宮内投与（IFN-tau 0, 500, 1000 μg）を行った。投与前後を通じて2-4時間毎に採血を行い、末梢白血球中のISG15発現量をリアルタイムPCR法により測定した。実験2：肉用牛を用いて、発情を確認した日に人工授精を行った。人工授精後、経時的に採血を行い、末梢白血球中のISG15発現量をリアルタイムPCR法により測定した。【結果および考察】IFN-tauの子宮内投与により、末梢白血球中のISG15発現量は増加し、投与後4時間でピークを示した。その後、徐々に投与前のレベルまで減少した。さらに、投与後4時間におけるISG15発現量とIFN-tau投与量との間に正の相関が認められたことから、末梢白血球中ISG15発現量を測定することで子宮内IFN-tau分泌量を推定できる可能性が示された。また、人工授精により受胎した群の発情後18日目におけるISG15発現量は、不受胎群と比較して高い傾向にあった。以上の結果から、人工授精後の妊娠認識時期における子宮内IFN-tau分泌量が受胎に関与する可能性が示された。

DOI： 10.14882/jrds.102.0.1086.0

CiNii Article

researchmap

Oog1 is a maternal effect gene required for the development of mouse preimplantation embryo 査読

N. Minami, H. Imaichi, S. Tsukamoto, Y. Ohta, S. Kito, K. Kimura, H. Imai

REPRODUCTION IN DOMESTIC ANIMALS   43   149 - 150   2008年7月

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC  

Web of Science

researchmap

Effect of FCS and BSA on hatching rate, apoptosis, and stress activated protein kinase activity in bovine blastocysts

Hisataka Iwata, Yosuke Sakaguchi, Yoshihiro Kon, Koji Kimura, Takehito Kuwayama, Yasuniri Monji

BIOLOGY OF REPRODUCTION   94 - 94   2008年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

Analysis of Oog1, an oocyte-specific gene, using transgenic RNAi approach

Hisashi Imaichi, Satoshi Tsukamoto, Yuki Ohta, Seiji Kito, Koji Kimura, Hiroshi Imai, Naojiro Minami

BIOLOGY OF REPRODUCTION   133 - 133   2008年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

黒毛和種のワンショット過剰排卵処理法の確立に関する研究(2) : 筋肉内投与法におけるホルモン量および試作ゲルの有効性の検討

林, 登, 星野, 洋一郎, 加藤, 誠二, 坂口, 慎一, 三品, 賢三, 関, 誠, 竹内, 昭司, 角川, 博哉, 木村, 康二

岐阜県畜産研究所研究報告   ( 7 )   21 - 25   2007年7月

　詳細を見る

記述言語：日本語  

黒毛和種における水酸化アルミニウムゲルを用いた卵胞刺激ホルモン（FSH）の1回投与法（ワンショット法）による過剰排卵処理法について、FSHの投与量及び試作水酸化アルミニウムゲルの実用性を検討した。試験1として、ワンショット法におけるホルモンの投与量を検討するため、黒毛和種経産牛にFSH30AU（n＝15）あるいは25AU（n＝13）を筋肉内投与する過剰排卵処理を実施し、採卵成績として採卵時の黄体数、大卵胞数、採卵数および正常胚数を調査し比較した。また試験2として、従来の市販水酸化アルミニウムゲル（Sigma社）に替えて、川崎三鷹製薬株式会社で開発された試作水酸化アルミニウムゲルを用いたワンショット法（FSH25AU筋肉内投与）と漸減投与法（FSH5、5、3、3、2、2計20AU筋肉内投与）による過剰排卵処理を、黒毛和種経産牛8頭に各1回ずつ実施し採卵成績を比較した。1．試験1における採卵時の平均黄体数と大卵胞数は、30AU区でそれぞれ7.0±4.8個と1.7±1.0個、25AU区でそれぞれ7.2±6.4個と1.0±0.8個であり、いずれにおいても両区間に有意な差は認められなかった。また、採卵個数と正常胚数についても、30AU区でそれぞれ5.2±4.7個と3.5±4.2個、25AU区でそれぞれ5.8±6.0個と4.8±5.4個であり、いずれにおいても両区間に有意な差は認められなかった。しかし、胚の品質は25AU区でより優れていた。2．試験2における採卵時の平均黄体数と大卵胞数は、ワンショット区でそれぞれ7.9±6.6個と3.6±4.8個、漸減投与区でそれぞれ9.4±6.3個と5.1±5.4個であり、いずれにおいても両区間に有意な差は認められなかった。また、採卵個数と正常胚数も、ワンショット区でそれぞれ6.1±5.8個と4.5±4.4個、漸減投与区でそれぞれ6.0±3.5個、2.6±3.0個であり、いずれにおいても両区間に有意な差は認められなかった。しかし、胚の品質ではワンショット区でより良い結果が得られた。以上の結果から、黒毛和種における水酸化アルミニウムゲルを用いたFSHの1回投与による過剰排卵処理では、FSHの投与量を25AUまで減量できることが示唆された。また新たに開発された水酸化アルミニウムゲルも従来のゲルの代わりに用いることができることが明らかとなった。

researchmap

A comparison of pregnancy maintenance after embryo transfer of Day 7 or 13 bovine embryos and the relationship between interferon-tau production of day 13 bovine embryos and pregnancy success

K. Kimura, N. Hayashi, H. Iwata

REPRODUCTION FERTILITY AND DEVELOPMENT   19 ( 1 )   222 - 223   2007年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：CSIRO PUBLISHING  

Web of Science

researchmap

第3章 流・死産の発生要因の解明(4)妊娠末期のクローン胎子の発育および分娩発来機構と正常分娩誘起法の開発に関する研究

平子誠, 平子誠, 青木真理, 青木真理, 木村康二, 木村康二, 花房泰子, 石崎宏, 假屋喜弘

農林水産省農林水産技術会議事務局研究成果   ( 444 )   2007年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

ウシ胚盤胞期胚の培養条件について

佐々木 康仁, 今 義拓, 坂口 陽祐, 山本 太陽, 木村 康二, 岩田 尚孝, 桑山 岳人, 門司 恭典

日本繁殖生物学会 講演要旨集   100   20077 - 20077   2007年

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

【目的】胚盤胞の透明帯（ZP）からの脱出は、着床前の重要なステップの一つである。また胚盤胞期胚以降の培養条件については不明な点が多い。本研究では、胚盤胞期胚をさらに30時間培養し、培地に添加する蛋白（血清およびBSA）、グルコース、ヒアルロン酸およびZPの切開が胚の脱出率に与える影響について検討した。
【方法】全ての培養には、合成卵管液(SOF)を用いた。授精処理後7日目に、5%血清(FCS)添加SOF(FCS-SOF)中で発生した胚盤胞を、それぞれの試験用培地(1胚/10μl)で30時間培養し、胚の脱出率と細胞数を調べた。FCS(5%)とBSA(5mg/ml)をそれぞれ添加した培地(FCS-SOFおよびBSA-SOF)を試験に用いたところ、胚盤胞の脱出率はBSA-SOFで高く(48%)、FCS-SOFでは低かった(25%)。FCSもしくはBSA-SOFにグルコース(1.5, 5.6, および15mM)をそれぞれ添加したところ、高濃度のグルコースの添加は、FCS-SOFでは脱出率を増やしたがBSA-SOFでは効果がなかった。異なる濃度のBSA(5, 15mg/ml)と血清(5, 20%)を培地に添加すると、FCSの濃度の増加は胚の脱出率を減らし(15%)、BSＡでは逆に増加した(65%)。透明帯を切開した胚盤胞をBSA-SOFおよびFCS-SOF中で培養するとBSA-SOFでは80％が脱出したがFCS-SOFでは28.8％が脱出した。ヒアルロン酸を2.5mg/mlの濃度で添加したFCSもしくはBSA-SOFで胚を培養するといずれの培地においても脱出率を促進しなかった。これらのことから胚盤胞期胚の操作や胚盤胞期胚以降の培養においては、FCSよりBSAを添加した培地のほうが胚の発育に良いことが示された。

DOI： 10.14882/jrds.100.0.20077.0

CiNii Article

researchmap

Expression of bovine interferon-tau variants according to sex and age of conceptuses.

Angela M. Walker, Koji Kimura, R. M. Roberts

BIOLOGY OF REPRODUCTION   93 - 93   2006年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

The effect of glucosamine concentration on the development and sex ratio of bovine embryos.

Koji Kimura, Hisataka Iwata, Jeremy G. Thompson

BIOLOGY OF REPRODUCTION   124 - 124   2006年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

哺乳動物の妊娠確立メカニズム

木村 康二

Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌   22 ( 3 )   101 - 118   2005年10月

　詳細を見る

記述言語：英語   出版者・発行元：日本哺乳動物卵子学会  

妊娠の成立のためのメカニズムは各動物種で異なる。マウスでは交尾時の子宮頸管刺激による下垂体由来プロラクチンが妊娠黄体形成に関与し、着床後は胎盤性ラクトジェンが妊娠を維持する。ヒトでは絨毛組織から分泌されるhCGが初期の妊娠を維持する。ウシやヒツジでは胚から分泌されるrFNI-τが子宮内膜からのPGF2αの分泌動態を変化させ黄体の退行を防ぐ。一方ブタでは、胚から分泌されるエストロジェンが妊娠認識物質として働き、子宮からのPGF2α分泌を血流方向から子宮腔方向へ変化させ、黄体退行を防ぐと考えられている。

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

その他リンク： http://agriknowledge.affrc.go.jp/RN/2010721570

A compariosn of IFN-tau messenger RNA expression between somatic nuclear transfer and in vitro produced female bovine blastocysts.

K Kimura, S Akagi, S Takahashi, H Iwata, H Kadokawa, M Aoki, M Hirako

BIOLOGY OF REPRODUCTION   230 - 230   2005年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

水酸化アルミニウムゲルを用いたFSH1回投与によるウシ過剰排卵誘起法

木村 康二

畜産技術 = Livestock technology   ( 590 )   2 - 4   2004年7月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：東京 : 畜産技術協会  

コレクション : 国立国会図書館デジタルコレクション > デジタル化資料 > 雑誌

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

その他リンク： https://ndlsearch.ndl.go.jp/books/R000000004-I7022760

Successful superovulation of cattle using a single intramuscular injection of FSH with aluminum hydroxide gel.

K Kimura, M Hirako, H Iwata, M Aoki

BIOLOGY OF REPRODUCTION   237 - 238   2004年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

Responsiveness of rabbits to superovulation treatment by single injection of follicle-stimulating hormone mixed with aluminum hydroxide gel.

S Hashimoto, K Kimura, T Kuramochi, K Aoyagi, M Hirako, M Kawaguchi, H Iwata, H Takahashi, M Hirao, K Kitada, K Hirasawa, M Ueda

BIOLOGY OF REPRODUCTION   236 - 237   2004年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

Effect of oxidative stress and inhibitors of the pentose-phosphate pathway on the sexual dimorphic expression of IFN-tau production by bovine blastocysts

K Kimura, LD Spate, RM Roberts

BIOLOGY OF REPRODUCTION   68   158 - 158   2003年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

The effects of high versus low oxygen and of the presence of glucose and fructose during culture on the sex ratio of bovine blastocysts.

RM Roberts, MP Green, LD Spate, K Kimura

BIOLOGY OF REPRODUCTION   68   250 - 251   2003年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

局所麻酔下での妊娠末期牛胎子へのカニュレーション手術による胎子血および羊・尿膜水採取

青木 真理, 木村 康二, 平子 誠, 花房 泰子, 石崎 宏, 假屋 喜弘

The Journal of reproduction and development   48 ( 5 )   455 - 460   2002年10月

　詳細を見る

記述言語：英語  

DOI： 10.1262/jrd.48.455

Web of Science

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

交雑種雌牛の親子放牧による双子哺育能力と栄養補給効果

青木 真理, 木村 康二, 鈴木 修

畜産草地研究所研究報告   1 ( 1 )   1 - 6   2002年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：農業技術研究機構畜産草地研究所  

交雑種雌牛の親子放牧における哺育能力と母牛あるいはその双子子牛への栄養補給効果を検討した。1996年から1997年にかけて、のべ17組の双子とその母牛をペレニアルライグラス主体草地に分娩約1週間後から輪換放牧し、子牛への別飼い飼料を給与する区(別飼い区)と給与せず母牛へのみ増し飼いする区(増し飼い区)に分け、哺乳量、母牛の栄養状態および子牛の別飼い飼料摂食行動を調査した。別飼い区では、のべ10組の親子を昼夜放牧し、子牛には放牧地内の別飼い施設で別飼い飼料を自由採食させた。増し飼い区では、のべ7組の親子を9:00～16:00の間放牧し、母牛には日量1～2kgの濃厚飼料を給与した。その結果、母牛の泌乳量は日量10.4～14.4kgあり、1頭当たり5.2～7.2kg摂取した。母牛の栄養状態は、両区とも低下傾向を示したが、別飼い区の減少が顕著であった。別飼い区では、別飼い飼料の摂食行動と摂取量が3か月齢以降で顕著に増加した。子牛の平均日増体量は、増し飼い区の方が0-4週齢時で有意に高かったが、その後は別飼い区の方が高く推移した。子牛の体型は、月齢とともに別飼い区が増し飼い区を上回る傾向にあり、6か月齢の胸囲で別飼い区が有意に大きかった。これらから、交雑種雌牛と双子子牛の親子放牧では、生後1か月齢から別飼い飼料の効果が現れることが示された。また、分娩後母牛の体重減少が顕著な草地においては、母牛への補助飼料給与も必要と考えられた。

DOI： 10.24514/00001884

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

その他リンク： http://agriknowledge.affrc.go.jp/RN/2010661547

Female, in vivo-produced bovine blastocysts produce over twice the amount of interferon-tau as males at the same stage of development.

K Kimura, RM Roberts, GE Seidle

BIOLOGY OF REPRODUCTION   66   154 - 155   2002年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

妊娠末期に牛胎子から血液および羊水・尿膜水を連続的に採取できる

青木真理, 木村康二, 平子誠, 花房泰子, 石崎宏, 仮屋喜弘

畜産草地研究成果情報   ( 1 )   2002年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

In vitro cultured male bovine embryos make the transition from morula to blastocyst more successfully than females.

K Kimura, MA Larson, RM Roberts

BIOLOGY OF REPRODUCTION   64   178 - 178   2001年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

娠妊末期における母ウシおよび胎子の血球数および血液生化学値の動態

花房泰子, 青木真理, 木村康二, 平子誠, 須藤まどか, 石崎宏, 仮屋喜弘

日本獣医学会学術集会講演要旨集   132nd   2001年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

Effect of Vascular Endothelial Growth Factor on the Early Development of IVM/IVF Bovine Embryos

LUO Hailing, KIMURA Koji, AOKI Mari, HIRAKO Makoto, ZHAO Youzhang

Journal of mammalian ova research = 日本哺乳動物卵子学会誌   17 ( 2 )   S51   2000年4月

　詳細を見る

記述言語：英語  

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

Effect of bovine interferon tau on the early development of bovine embryos.

K Kimura, H Iwata, M Aoki, M Hirako

BIOLOGY OF REPRODUCTION   62   250 - 250   2000年

　詳細を見る

記述言語：英語   掲載種別：研究発表ペーパー・要旨（国際会議）   出版者・発行元：SOC STUDY REPRODUCTION  

Web of Science

researchmap

妊娠末期における母ウシおよび胎子の血球数動態

花房泰子, 青木真理, 木村康二, 平子誠, 石崎宏, 仮屋喜弘

関東畜産学会大会講演要旨集   55th   2000年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

放牧における発情牛の運動量の解析(第2報) : ランダムな間隔で測定した場合の解析方法の検討

梅田 直円, 加茂 幹男, 青木 真理, 木村 康二, 山田 知哉

日本家畜管理学会誌 = Japanese journal of livestock management   35 ( supplement )   32 - 33   1999年3月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：日本家畜管理学会  

DOI： 10.20652/jjlm.35.supplement_32

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

ウシ胎子へのカテーテル装着と胎子血採取の試み

青木真理, 木村康二, 平子誠, 石崎宏, 仮屋喜弘, 花房泰子

日本畜産学会大会講演要旨   96th   1999年

　詳細を見る

J-GLOBAL

researchmap

F1雌牛による双子の安定生産技術

鈴木 修, 青木 真理, 木村 康二

畜産の研究   50 ( 6 )   675 - 680   1996年6月

　詳細を見る

記述言語：日本語   出版者・発行元：養賢堂  

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

ラット桑実胚の高濃度糖アルコール液によるガラス化保存に関する研究

内海 恭三, 西田 美恵子, 木村 康二, 入谷 明

38 ( 5 )   j7 - j13   1992年

　詳細を見る

記述言語：英語   出版者・発行元：公益社団法人 日本繁殖生物学会  

ガラス化液に使われる凍害保護物質の細胞毒性,ガラス化のし易さ,ガラス化状態の安定性を評価して,ガラス化液の特性とラット桑実胚のガラス化保存能との関係を調べた.Glycerol(GI)は5分間の室温処理では50%の濃度まで胚の生存性に影響を与えなかったが,50%濃度のpropandiol(Pd)やbutandiol(Bd)は1分の処置により致命的な影響を与えた.しかし,これら凍害保護物質の25%液に25%Glを加えた混合液では5分の処置でも胚の障害は見られなかった.室温で処理した胚のガラス化保存では,40%および50%のGlを含む液でガラス化保存した場合,76%および88%が生存していたが,PdおよびBdを用いた場合はいずれの濃度でも生存胚はみられなかった.しかし,25%のPdや25%Bdに25%Glを混合したガラス化液では,それぞれ75%と69%の胚が生存していた.さらに,細胞非透過性の5%percollあるいはpolyvinylpyroridoneを添加した場合,胚の生存性が改善された.ガラス化液の濃度とガラス化能との関係から,Pd>Bd>Glの順にガラス化し易いこと,ガラス化液の脱ガラス化温度から,Pd>Gl>Bdの順にガラス化の安定性が高いことが認められた.以上の成績から,胚のガラス化は簡易性およびガラス化状態の安定性などから,高濃度のPdやBdは毒性が高いので,それらを細胞毒性の少ないGlとの混合液が有効であることが示唆された.

DOI： 10.1262/jrd.38.5_j7

CiNii Article

CiNii Books

researchmap

その他リンク： https://ndlsearch.ndl.go.jp/books/R000000004-I3813102