Grant amount：\4290000 （ Direct expense: \3300000 、 Indirect expense：\990000 ）

ヒト単球系細胞THP-1をマクロファージに分化させて、精油と慢性閉塞性肺疾患（COPD）治療薬で処理した後に、タバコ抽出液（CSE）で刺激して、炎症性サイトカインmRNA発現、シグナル伝達経路および貪食能を指標として、精油とCOPD治療薬との相乗作用を検討する計画であった。マクロファージにおけるCSE誘導性炎症性サイトカインmRNAの発現は、ラベンダー精油とユーカリ精油で有意に抑制されることを明らかにしていた。そこでCSEが活性化するシグナル伝達経路に対する精油の作用を明らかにするために、NF-κB、p38 MAPK、JNK経路について検討した。NF-κB、p38 MAPK、JNK経路はすべてCSE刺激によって活性化されるが、精油はJNK経路を有意に抑制することが明らかになった。ラベンダー精油およびユーカリ精油が抑制するCSE誘導性炎症性サイトカインと関与するシグナル伝達経路が判明し、精油の作用を評価する指標が確立できた。しかし、マクロファージを精油で前処置して、CSEで刺激した後の貪食能は、CSE未処理マクロファージに比べて低下した。本研究において、ラベンダー精油やユーカリ精油にはCSE刺激によるマクロファージの貪食能低下を抑制する作用は認められなかった。
次に精油とCOPD治療薬との相乗作用を明らかにするために、マクロファージにおける長時間作用性抗コリン薬のCSE誘導性炎症性サイトカイン発現への作用を調べたところ、発現抑制を認めなかった。一方テオフィリンは、CSE誘導性炎症性サイトカインの発現を抑制した。そこで、精油とテオフィリンを併用したところ、精油やテオフィリン単独よりも効果的にCSE誘導性炎症性サイトカインの発現を抑制する作用を認めず、ラベンダー精油やユーカリ精油は、COPD治療薬と相乗作用を示さなかった。

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Grant amount：\4290000 （ Direct expense: \3300000 、 Indirect expense：\990000 ）

本研究では粘液分泌に関わる杯細胞と線維化に関わる線維芽細胞へ効果のある精油を同定するとともに、作用メカニズムを明らかにすることを目的としていた。昨年度の慢性喘息モデルマウスを用いた評価において、ラベンダー精油処置の喘息群でPAS陽性細胞（粘液産生）数の減少と膠原繊維面積の減少を確認した。そこで今年度は精油の気道の粘液産生に対する効果について気道上皮細胞を用いて評価を行った。ヒト正常気管支上皮細胞（NHBE）の培地にIL-13を添加後、気相液相界面培養法（Air Liquid Interface ; ALI法）を用いて、14日間で杯細胞へと分化させる。ALI法により気道上皮細胞を基底細胞、繊毛上皮細胞の分化・層形成させるが、IL-13添加により線毛上皮細胞への分化を抑制し、杯細胞化生を誘導していく。0日目より精油を培地に添加していき、対照群としては精油希釈に用いるDMSOを添加した。精油は市販され、入手可能なものを用い、MTTアッセイを行い細胞増殖に影響のない精油濃度を確認したのち添加した。IL-13、精油を含んだ培地は１日おきに交換した。細胞から発現の変化をMUC5ACとペリオスチンで17種類の精油について評価している途中で、その後粘液と線維化に抑制効果のあることを同定した精油について作用機序を解析していく予定であったが、年度途中の研究代表者の退職による資格喪失により伴い、本実験計画は廃止することとなった。

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Grant amount：\4030000 （ Direct expense: \3100000 、 Indirect expense：\930000 ）

The aim of this research was to establish a screening system to quantitatively evaluate the anti-inflammatory effect of essential oils and to clarify the difference in aromatherapy efficacy depending on the action route. We added 47 types of essential oils to skin and bronchial cells, and identified several types of essential oils that are effective for cytokine-stimulated inflammation. This study has revealed that even the same essential oil has different effects depending on the action route.

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Grant amount：\1950000 （ Direct expense: \1500000 、 Indirect expense：\450000 ）

We examined the inflammatory effects of the essential oils used in aromatherapy with murine model of elastase induced chronic obstructive pulmonary disease (COPD). We exposed the COPD mice to lavender essential oil or eucalyptus essential oil by inhalation, and then measured pulmonary functions, total cell numbers in bronchoalveolar lavage fluids, histological analysis and mRNA expressions in lungs of mice. Lavender essential oil suppressed alveolar damage in COPD mice. Eucalyptus essential oil suppressed the infiltration of inflammatory cells into BALF and the alveolar damage in early phase of pathologic process of murine COPD. We found that lavender essential oil and eucalyptus essential oil had the anti-inflammatory effects in murine model of COPD.

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