2021/12/15 更新

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カナヤマ ナオキ
金山 直樹
KANAYAMA Naoki
所属
ヘルスシステム統合科学学域 准教授
職名
准教授
外部リンク

学位

  • 博士(工学) ( 京都大学 )

研究キーワード

  • Antibody

  • Lymphocyte

  • 抗体

  • リンパ球

  • B細胞

  • 細胞工学

  • 免疫

研究分野

  • ライフサイエンス / 機能生物化学

  • ナノテク・材料 / 生体化学

  • ライフサイエンス / 免疫学

  • ものづくり技術(機械・電気電子・化学工学) / バイオ機能応用、バイオプロセス工学

学歴

  • 京都大学 大学院   工学研究科   合成・生物化学専攻

    - 1998年

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    国名: 日本国

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  • 京都大学   Graduate School, Division of Engineering  

    - 1998年

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  • 京都大学   Faculty of Engineering  

    - 1992年

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  • 京都大学   Faculty of Engineering  

    - 1992年

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    国名: 日本国

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経歴

  • 岡山大学   ヘルスシステム統合科学研究科   准教授

    2018年4月 - 現在

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  • 岡山大学自然科学研究科機能分子化学専攻

    2007年4月 - 2018年3月

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  • - Associate Professor,Chemistry and Biochemistry,Graduate School of Natural Science and Technology,Okayama University

    2007年

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  • Associate Professor,Chemistry and Biochemistry,Graduate School of Natural Science and Technology,Okayama University

    2005年 - 2007年

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  • 岡山大学自然科学研究科機能分子化学専攻 助教授

    2005年 - 2007年

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  • Senior Assistant Professor,Dept. of Bioscience and Biotechnology,Faculty of Engineering,Okayama University

    2002年 - 2005年

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  • 岡山大学   Faculty of Engineering, Department of Bioscience and Biotechnology

    2002年 - 2005年

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  • Research Associate,Dept. of Bioscience and Biotechnology,Faculty of Engineering,Okayama University

    1998年 - 2002年

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  • 岡山大学   Faculty of Engineering, Department of Bioscience and Biotechnology

    1998年 - 2002年

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  • Postdoctoral Fellowships of Japan Society for the Promotion of Science

    1996年 - 1998年

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  • 京都大学   Graduate School of Engineering, Department of Synthetic Chemistry and Biological Chemistry

    1996年 - 1998年

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所属学協会

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論文

  • Oligomerization of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase 査読

    Yusei Fukumoto, Yuhei Harada, Satomi Ohtsuka, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Naoya Hatano, Hiroyuki Sakagami, Hiroshi Tokumitsu

    Biochemical and Biophysical Research Communications   587   160 - 165   2022年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Elsevier BV  

    DOI: 10.1016/j.bbrc.2021.11.105

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  • Regulation of the tubulin polymerization-promoting protein by Ca2+/S100 proteins 査読

    Seita Doi, Naoki Fujioka, Satomi Ohtsuka, Rina Kondo, Maho Yamamoto, Miwako Denda, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Naoya Hatano, Ryo Morishita, Takafumi Hasegawa, Hiroshi Tokumitsu

    Cell Calcium   96   102404 - 102404   2021年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Elsevier BV  

    DOI: 10.1016/j.ceca.2021.102404

    PubMed

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  • Identification and Biochemical Characterization of High Mobility Group Protein 20A as a Novel Ca2+/S100A6 Target 査読

    Maho Yamamoto, Rina Kondo, Haruka Hozumi, Seita Doi, Miwako Denda, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Naoya Hatano, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu

    Biomolecules   11 ( 4 )   510 - 510   2021年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:MDPI AG  

    During screening of protein-protein interactions, using human protein arrays carrying 19,676 recombinant glutathione s-transferase (GST)-fused human proteins, we identified the high-mobility protein group 20A (HMG20A) as a novel S100A6 binding partner. We confirmed the Ca2+-dependent interaction of HMG20A with S100A6 by the protein array method, biotinylated S100A6 overlay, and GST-pulldown assay in vitro and in transfected COS-7 cells. Co-immunoprecipitation of S100A6 with HMG20A from HeLa cells in a Ca2+-dependent manner revealed the physiological relevance of the S100A6/HMG20A interaction. In addition, HMG20A has the ability to interact with S100A1, S100A2, and S100B in a Ca2+-dependent manner, but not with S100A4, A11, A12, and calmodulin. S100A6 binding experiments using various HMG20A mutants revealed that Ca2+/S100A6 interacts with the C-terminal region (residues 311–342) of HMG20A with stoichiometric binding (HMG20A:S100A6 dimer = 1:1). This was confirmed by the fact that a GST-HMG20A mutant lacking the S100A6 binding region (residues 311–347, HMG20A-ΔC) failed to interact with endogenous S100A6 in transfected COS-7 cells, unlike wild-type HMG20A. Taken together, these results identify, for the first time, HMG20A as a target of Ca2+/S100 proteins, and may suggest a novel linkage between Ca2+/S100 protein signaling and HMG20A function, including in the regulation of neural differentiation.

    DOI: 10.3390/biom11040510

    PubMed

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  • Development and Characterization of Novel Molecular Probes for Ca2+/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase, Derived from STO-609. 査読 国際誌

    Satomi Ohtsuka, Yui Ozeki, Moeno Fujiwara, Tomoyuki Miyagawa, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Naoya Hatano, Futoshi Suizu, Teruhiko Ishikawa, Hiroshi Tokumitsu

    Biochemistry   59 ( 17 )   1701 - 1710   2020年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase (CaMKK) activates particular multifunctional kinases, including CaMKI, CaMKIV, and 5'AMP-activated protein kinase (AMPK), resulting in the regulation of various Ca2+-dependent cellular processes, including neuronal, metabolic, and pathophysiological pathways. We developed and characterized a novel pan-CaMKK inhibitor, TIM-063 (2-hydroxy-3-nitro-7H-benzo[de]benzo[4,5]imidazo[2,1-a]isoquinolin-7-one) derived from STO-609 (7H-benzimidazo[2,1-a]benz[de]isoquinoline-7-one-3-carboxylic acid), and an inactive analogue (TIM-062) as molecular probes for the analysis of CaMKK-mediated cellular responses. Unlike STO-609, TIM-063 had an inhibitory activity against CaMKK isoforms (CaMKKα and CaMKKβ) with a similar potency (Ki = 0.35 μM for CaMKKα, and Ki = 0.2 μM for CaMKKβ) in vitro. Two TIM-063 analogues lacking a nitro group (TIM-062) or a hydroxy group (TIM-064) completely impaired CaMKK inhibitory activities, indicating that both substituents are necessary for the CaMKK inhibitory activity of TIM-063. Enzymatic analysis revealed that TIM-063 is an ATP-competitive inhibitor that directly targets the catalytic domain of CaMKK, similar to STO-609. TIM-063 suppressed the ionomycin-induced phosphorylation of exogenously expressed CaMKI, CaMKIV, and endogenous AMPKα in HeLa cells with an IC50 of ∼0.3 μM, and it suppressed CaMKK isoform-mediated CaMKIV phosphorylation in transfected COS-7 cells. Thus, TIM-063, but not the inactive analogue (TIM-062), displayed cell permeability and the ability to inhibit CaMKK activity in cells. Taken together, these results indicate that TIM-063 could be a useful tool for the precise analysis of CaMKK-mediated signaling pathways and may be a promising lead compound for the development of therapeutic agents for the treatment of CaMKK-related diseases.

    DOI: 10.1021/acs.biochem.0c00149

    PubMed

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  • Phosphorylation and dephosphorylation of Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase β at Thr144 in HeLa cells 査読

    Shota Takabatake, Yusei Fukumoto, Satomi Ohtsuka, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Hiroyuki Sakagami, Naoya Hatano, Hiroshi Tokumitsu

    Biochemical and Biophysical Research Communications   525 ( 1 )   251 - 257   2020年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Elsevier BV  

    DOI: 10.1016/j.bbrc.2020.02.056

    PubMed

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  • SRSF1-3, a splicing and somatic hypermutation regulator, controls transcription of IgV genes via chromatin regulators SATB2, UBN1 and histone variant H3.3. 査読 国際共著 国際誌

    Amit Kumar Singh, Anubhav Tamrakar, Ankit Jaiswal, Naoki Kanayama, Prashant Kodgire

    Molecular immunology   119   69 - 82   2020年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    SRSF1, a member of the SR protein family, is an important splicing factor and regulator of splicing. Multiple splicing isoforms have been reported for this gene. SRSF1-3, a splicing isoform of SRSF1, is necessary for AID-dependent SHM of IgV genes. However, its precise role in SHM remains enigmatic. Transcriptomic analysis of SRSF1-3 reconstituted cells shows upregulation of transcription factor SATB2 and chromatin regulator UBN1. The increased SATB2 and UBN1 are strikingly enriched in the MAR and promoter regions of the IgL gene, respectively. Furthermore, UBN1 enrichment at the promoter region was coupled with a hundred-fold enhanced occupancy of the histone variant H3.3 at the IgL promoter, that is a hallmark of efficient SHM. The enhanced occupancy of SATB2 at the MAR, UBN1 and histone variant H3.3 at the IgL promoter leads to an increase in IgL transcription, revealing a role of SRSF1-3 in SHM. Thus, SRSF1-3 is likely involved in the regulation of SHM, via upregulation of a crucial transcription factor SATB2, as well as, by overexpression of a chromatin modulator of Ig genes, UBN1, which further assists in the recruitment of the histone variant H3.3. Furthermore, the splicing isoform SRSF1-3 regulates alternate splicing pattern of splicing isoforms for various crucial genes. The present study provides the first evidence that a splicing isoform of an SR protein can regulate the post-transcriptional processing of RNA in vivo.

    DOI: 10.1016/j.molimm.2020.01.005

    PubMed

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  • Splicing regulator SRSF1-3 that controls somatic hypermutation of IgV genes interacts with topoisomerase 1 and AID. 査読 国際共著 国際誌

    Kumar Singh A, Tamrakar A, Jaiswal A, Kanayama N, Agarwal A, Tripathi P, Kodgire P

    Molecular immunology   116   63 - 72   2019年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1016/j.molimm.2019.10.002

    PubMed

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  • Regulation of Ca<sup>2+</sup>/calmodulin-dependent protein kinase kinase β by cAMP signaling. 査読

    Takabatake S, Ohtsuka S, Sugawara T, Hatano N, Kanayama N, Magari M, Sakagami H, Tokumitsu H

    Biochimica et biophysica acta. General subjects   1863 ( 4 )   672 - 680   2019年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1016/j.bbagen.2018.12.012

    PubMed

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  • Interaction of S100A6 with Target Proteins In Vitro and in Living Cells. 査読

    Sakane K, Yamaguchi F, Tsuchiya M, Kondo R, Kanayama N, Magari M, Hatano N, Kobayashi R, Tokumitsu H

    Methods Mol. Biol.   1929   367 - 377   2019年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

    DOI: 10.1007/978-1-4939-9030-6_23

    PubMed

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  • IL-34 cell surface localization regulated by the 78 kDa glucose-regulated protein facilitates the differentiation of monocytic cells. 査読

    Ogawa S, Matsuoka Y, Takada M, Matsui K, Yamane F, Kubota E, Yasuhara S, Hieda K, Kanayama N, Hatano N, Tokumitsu H, Magari M

    The Journal of biological chemistry   294 ( 7 )   2386 - 2396   2018年12月

  • ヘルスシステムの理解とその応用 濾胞樹状細胞による抗体の親和性成熟の制御機構の解明(Interdisciplinary Science and Engineering in Health Systems Immunological functions of follicular dendritic cells on affinity maturation of antibody)

    Magari Masaki, Ogawa Sayaka, Matsuoka Yukiko, Takada Miho, Kanayama Naoki, Tokumitsu Hiroshi

    生物物理   58 ( Suppl.1-2 )   S197 - S197   2018年8月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:(一社)日本生物物理学会  

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  • AMP-activated protein kinase-mediated feedback phosphorylation controls the Ca2+/calmodulin (CaM) dependence of Ca2+/CaM-dependent protein kinase kinase β 査読

    Akihiro Nakanishi, Naoya Hatano, Yuya Fujiwara, Arian Sha'ri, Shota Takabatake, Hiroki Akano, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Naohito Nozaki, Hiroshi Tokumitsu

    Journal of Biological Chemistry   292 ( 48 )   19804 - 19813   2017年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:American Society for Biochemistry {\&} Molecular Biology ({ASBMB})  

    DOI: 10.1074/jbc.M117.805085

    Web of Science

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  • Identification and characterization of a centrosomal protein, FOR20 as a novel S100A6 target 査読

    Kyohei Sakane, Miyu Nishiguchi, Miwako Denda, Fuminori Yamagchi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS   491 ( 4 )   980 - 985   2017年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE  

    S100A6 is a Ca2+-signal transducer that interacts with numerous proteins and regulates their biochemical functions. Here we identified a centrosomal protein, FOR20 (FOP-related protein of 20 kDa) as a novel S100A6 target by screening protein microarrays carrying 19,676 recombinant GST-fused human proteins. Binding experiments revealed that S100A6 interacts with the N-terminal region (residues 1-30) of FOR20 in a Ca2+-dependent manner in vitro and in living cells. Several S100 proteins including S100A1, A2, A4, All, B also exhibited Ca2+-dependent interactions with FOR20 as well as S100A6. We found that two distantly related centrosomal proteins, FOP and OFD1, also possess N-terminal regions with a significant sequence similarity to the putative S100A6-binding site (residues 1-30) in FOR20 and are capable of binding to S100A6 in a Ca2+-dependent manner. Taken together, these results may indicate that S100A6 interacts with FOR20 and related centrosomal proteins through a conserved N-terminal domain, suggesting a novel Ca2+-dependent regulation of centrosomal function. (C) 2017 Elsevier Inc. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.07.161

    Web of Science

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  • SRSF1-3 contributes to diversification of the immunoglobulin variable region gene by promoting accumulation of AID in the nucleus 査読

    Yuka Kawaguchi, Hiroaki Nariki, Naoko Kawamoto, Yuichi Kanehiro, Satoshi Miyazaki, Mari Suzuki, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu, Naoki Kanayama

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS   485 ( 2 )   261 - 266   2017年4月

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    担当区分:最終著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE  

    Activation-induced cytidine deaminase (AID) is essential for diversification of the Ig variable region (IgV). AID is excluded from the nucleus, where it normally functions. However, the molecular mechanisms responsible for regulating AID localization remain to be elucidated. The SR-protein splicing factor SRSF1 is a nucleocytoplasmic shuttling protein, a splicing isoform of which called SRSF1-3, has previously been shown to contribute to IgV diversification in chicken DT40 cells. In this study, we examined whether SRSFI-3 functions in IgV diversification by promoting nuclear localization of AID. AID expressed alone was localized predominantly in the cytoplasm. In contrast, co-expression of AID with SRSFI-3 led to the nuclear accumulation of both AID and SRSF1-3 and the formation of a protein complex that contained them both, although SRSF1-3 was dispensable for nuclear import of AID. Expression of either SRSF1-3 or a C-terminally-truncated AID mutant increased IgV diversification in DT40 cells. However, over expression of exogenous SRSF1-3 was unable to further enhance IgV diversification in DT40 cells expressing the truncated AID mutant, although SRSFI-3 was able to form a protein complex with the AID mutant. These results suggest that SRSF1-3 promotes nuclear localization of AID probably by forming a nuclear protein complex, which might stabilize nuclear AID and induce IgV diversification in an AID C terminus-dependent manner. (C) 2017 Elsevier Inc. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.bbrc.2017.02.097

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  • SRSF1-3 has a role in nuclear localization of AID by regulating its nuclear export 査読

    N. Kanayama, Y. Kawaguchi, N. Kawamoto, H. Nariki, S. Miyazaki, K. Yokoyama, M. Magari, H. Ohmori, H. Tokumitsu

    EUROPEAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY   46   1142 - 1142   2016年8月

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    担当区分:筆頭著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(国際会議プロシーディングス)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    Web of Science

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  • Analysis of a role for SRSF1-3 in a transcription-coupled process during IgV hypermutation 査読

    Y. Kawaguchi, K. Yokoyama, N. Kawamoto, H. Nariki, Y. Matsuyama, Y. Kanehiro, T. Hikasa, M. Magari, H. Ohmori, H. Tokumitsu, N. Kanayama

    EUROPEAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY   46   1267 - 1268   2016年8月

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    担当区分:最終著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(国際会議プロシーディングス)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

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  • IL-34-dependent differentiation of monocytic cell with B cell stimulating activity 査読

    M. Magari, S. Ogawa, Y. Toya, K. Hieda, F. Yamane, N. Kanayama, H. Tokumitsu, H. Ohmori

    EUROPEAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY   46   1139 - 1139   2016年8月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(国際会議プロシーディングス)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

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  • Identification of striated muscle activator of Rho signaling (STARS) as a novel calmodulin target by a newly developed genome-wide screen 査読

    Yusui Furuya, Miwako Denda, Kyohei Sakane, Tomoko Ogusu, Sumio Takahashi, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryo Morishita, Hiroshi Tokumitsu

    CELL CALCIUM   60 ( 1 )   32 - 40   2016年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:CHURCHILL LIVINGSTONE  

    To search for novel target(s) of the Ca2+-signaling transducer, calmodulin (CaM), we performed a newly developed genome-wide CaM interaction screening of 19,676 GST-fused proteins expressed in human. We identified striated muscle activator of Rho signaling (STARS) as a novel CaM target and characterized its CaM binding ability and found that the Ca2+/CaM complex interacted stoichiometrically with the N-terminal region (Ala13-Gln35) of STARS in vitro as well as in living cells. Mutagenesis studies identified Ile20 and Trp33 as the essential hydrophobic residues in CaM anchoring. Furthermore, the CaM binding deficient mutant (Ile20Ala, Trp33Ala) of STARS further enhanced its stimulatory effect on SRF-dependent transcriptional activation. These results suggest a connection between Ca2+-signaling via excitation-contraction coupling and the regulation of STARS-mediated gene expression in muscles. (C) 2016 Elsevier Ltd. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.ceca.2016.04.004

    Web of Science

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  • Differential AMP-activated Protein Kinase (AMPK) Recognition Mechanism of Ca2+/Calmodulin-dependent Protein Kinase Kinase Isoforms 査読

    Yuya Fujiwara, Yoshinori Kawaguchi, Tomohito Fujimoto, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu

    JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY   291 ( 26 )   13802 - 13808   2016年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC BIOCHEMISTRY MOLECULAR BIOLOGY INC  

    Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase (CaMKK) is a known activating kinase for AMP-activated protein kinase (AMPK). In vitro, CaMKK phosphorylates Thr(172) in the AMPK subunit more efficiently than CaMKK, with a lower K-m (approximate to 2 m) for AMPK, whereas the CaMKI phosphorylation efficiencies by both CaMKKs are indistinguishable. Here we found that subdomain VIII of CaMKK is involved in the discrimination of AMPK as a native substrate by measuring the activities of various CaMKK/CaMKK chimera mutants. Site-directed mutagenesis analysis revealed that Leu(358) in CaMKK/Ile(322) in CaMKK confer, at least in part, a distinct recognition of AMPK but not of CaMKI.

    DOI: 10.1074/jbc.M116.727867

    Web of Science

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  • Analysis of Distinct Roles of CaMKK Isoforms Using STO-609-Resistant Mutants in Living Cells 査読

    Yuya Fujiwara, Yuri Hiraoka, Tomohito Fujimoto, Naoki Kanayama, Masaki Magari, Hiroshi Tokumitsu

    BIOCHEMISTRY   54 ( 25 )   3969 - 3977   2015年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER CHEMICAL SOC  

    To assess the isoform specificity of the Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase (CaMKK)-mediated signaling pathway using a CaMKK inhibitor (STO-609) in living cells, we have established A549 cell lines expressing STO-609-resistant mutants of CaMKK isoforms. Following serial mutagenesis studies, we have succeeded in obtaining an STO-609-resistant CaMKK alpha mutant (Ala292Thr/Leu233Phe) and a CaMKK beta mutant (Ala328Thr/Val269Phe), which showed sensitivity to STO-609 that was 2-3 orders of magnitude lower without an appreciable effect on kinase activity or CaM requirement. These results are consistent with the results obtained for CaMKK activities in the extracts of A549 cells stably expressing the mutants of CaMKK isoforms. Ionomycin-induced 5'-AMP-activated protein kinase (AMPK) phosphorylation at Thr172 in A549 cells expressing either the wildtype or the STO-609-resistant mutant of CaMKK alpha was completely suppressed by STO-609 treatment but resistant to the inhibitor in the presence of the CaMKK beta mutant (Ala328Thr/Val269Phe). This result strongly suggested that CaMKK beta is responsible for ionomycin-induced AMPK activation, which supported previous reports. In contrast, ionomycin-induced CaMKIV phosphorylation at Thr196 was resistant to STO-609 treatment in A549 cells expressing STO-609-resistant mutants of both CaMKK isoforms, indicating that both CaMKK. isoforms are capable of phosphorylating and activating CaMKIV in living cells. Considering these results together, STO-609-resistant CaMKK mutants developed in this study may be useful for distinguishing CaMKK isoform-mediated signaling pathways in combination with the use of an inhibitor compound.

    DOI: 10.1021/acs.biochem.5b00149

    Web of Science

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  • CSF-1 receptor-mediated differentiation of a new type of monocytic cell with B cell-stimulating activity: its selective dependence on IL-34 査読

    Fumihiro Yamane, Yumiko Nishikawa, Kazue Matsui, Miki Asakura, Eriko Iwasaki, Koji Watanabe, Hikaru Tanimoto, Hiroki Sano, Yuki Fujiwara, E. Richard Stanley, Naoki Kanayama, Neil A. Mabbott, Masaki Magari, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF LEUKOCYTE BIOLOGY   95 ( 1 )   19 - 31   2014年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:FEDERATION AMER SOC EXP BIOL  

    Occurrence of a CSF-1 receptor-dependent monocyte differentiation process driven by IL-34, but not CSF-1. With the use of a mouse FDC line, FL-Y, we have been analyzing roles for FDCs in controlling B cell fate in GCs. Beside these regulatory functions, we fortuitously found that FL-Y cells induced a new type of CD11b(+) monocytic cells (F4/80(+), Gr-1(-), Ly6C(-), I-A/E-/lo, CD11c(-), CD115(+), CXCR4(+), CCR2(+), CX(3)CR1(-)) when cultured with a Lin(-)c-kit(+) population from mouse spleen cells. The developed CD11b(+) cells shared a similar gene-expression profile to mononuclear phagocytes and were designated as FDMCs. Here, we describe characteristic immunological functions and the induction mechanism of FDMCs. Proliferation of anti-CD40 antibody-stimulated B cells was markedly accelerated in the presence of FDMCs. In addition, the FDMC-activated B cells efficiently acquired GC B cell-associated markers (Fas and GL-7). We observed an increase of FDMC-like cells in mice after immunization. On the other hand, FL-Y cells were found to produce CSF-1 as well as IL-34, both of which are known to induce development of macrophages and monocytes by binding to the common receptor, CSF-1R, expressed on the progenitors. However, we show that FL-Y-derived IL-34, but not CSF-1, was selectively responsible for FDMC generation using neutralizing antibodies and RNAi. We also confirmed that FDMC generation was strictly dependent on CSF-1R. To our knowledge, a CSF-1R-mediated differentiation process that is intrinsically specific for IL-34 has not been reported. Our results provide new insights into understanding the diversity of IL-34 and CSF-1 signaling pathways through CSF-1R.

    DOI: 10.1189/jlb.0613311

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  • In vitro substrate phosphorylation by Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase using guanosine-5 '-triphosphate as a phosphate donor 査読

    Saki Yurimoto, Tomohito Fujimoto, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Ryoji Kobayashi, Hiroshi Tokumitsu

    BMC BIOCHEMISTRY   13   27   2012年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:BIOMED CENTRAL LTD  

    Background: Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase (CaMKK) phosphorylates and activates particular downstream protein kinases -including CaMKI, CaMKIV, and AMPK- to stimulate multiple Ca2+-signal transduction pathways. To identify previously unidentified CaMKK substrates, we used various nucleotides as phosphate donors to develop and characterize an in vitro phosphorylation assay for CaMKK.
    Results: Here, we found that the recombinant CaMKK isoforms were capable of utilizing Mg-GTP as a phosphate donor to phosphorylate the Thr residue in the activation-loop of CaMKI alpha (Thr(177)) and of AMPK (Thr(172)) in vitro. Kinetic analysis indicated that the K-m values of CaMKK isoforms for GTP (400-500 mu M) were significantly higher than those for ATP (similar to 15 mu M), and a 2- to 4-fold decrease in V-max was observed with GTP. We also confirmed that an ATP competitive CaMKK inhibitor, STO-609, also competes with GTP to inhibit the activities of CaMKK isoforms. In addition, to detect enhanced CaMKI phosphorylation in brain extracts with Mg-GTP and recombinant CaMKKs, we found potential CaMKK substrates of similar to 45 kDa and similar to 35 kDa whose Ca2+/CaM-induced phosphorylation was inhibited by STO-609.
    Conclusions: These results indicated that screens that use STO-609 as a CaMKK inhibitor and Mg-GTP as a CaMKK-dependent phosphate donor might be useful to identify previously unidentified downstream target substrates of CaMKK.

    DOI: 10.1186/1471-2091-13-27

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  • Activation-induced cytidine deaminase (AID)-dependent somatic hypermutation requires a splice isoform of the serine/arginine-rich (SR) protein SRSF1 査読

    Yuichi Kanehiro, Kagefumi Todo, Misaki Negishi, Junji Fukuoka, Wenjian Gan, Takuya Hikasa, Yoshiaki Kaga, Masayuki Takemoto, Masaki Magari, Xialu Li, James L. Manley, Hitoshi Ohmori, Naoki Kanayama

    PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA   109 ( 4 )   1216 - 1221   2012年1月

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    担当区分:最終著者, 責任著者   記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:NATL ACAD SCIENCES  

    Somatic hypermutation (SHM) of Ig variable region (IgV) genes requires both IgV transcription and the enzyme activation-induced cytidine deaminase (AID). Identification of a cofactor responsible for the fact that IgV genes are much more sensitive to AID-induced mutagenesis than other genes is a key question in immunology. Here, we describe an essential role for a splice isoform of the prototypical serine/arginine-rich (SR) protein SRSF1, termed SRSF1-3, in AID-induced SHM in a DT40 chicken B-cell line. Unexpectedly, we found that SHM does not occur in a DT40 line lacking SRSF1-3 (DT40-ASF), although it is readily detectable in parental DT40 cells. Strikingly, overexpression of AID in DT40-ASF cells led to a large increase in nonspecific (off-target) mutations. In contrast, introduction of SRSF1-3, but not SRSF1, into these cells specifically restored SHM without increasing off-target mutations. Furthermore, we found that SRSF1-3 binds preferentially to the IgV gene and inhibits processing of the Ig transcript, providing a mechanism by which SRSF1-3 makes the IgV gene available for AID-dependent SHM. SRSF1 not only acts as an essential splicing factor but also regulates diverse aspects of mRNA metabolism and maintains genome stability. Our findings, thus, define an unexpected and important role for SRSF1, particularly for its splice variant, in enabling AID to function specifically on its natural substrate during SHM.

    DOI: 10.1073/pnas.1120368109

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  • IL-21-Dependent B Cell Death Driven by Prostaglandin E-2, a Product Secreted from Follicular Dendritic Cells 査読

    Masaki Magari, Yumiko Nishikawa, Yasumasa Fujii, Yumi Nishio, Koji Watanabe, Michiya Fujiwara, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF IMMUNOLOGY   187 ( 8 )   4210 - 4218   2011年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS  

    In germinal centers (GCs), B cells are selected through interaction with follicular dendritic cells bearing immune complexes and follicular helper T (Tfh) cells secreting Tfh cytokines, including IL-21. To analyze these cellular interactions, we have explored culture conditions that can simulate GC B cell selection in vitro using a mouse follicular dendritic cell line, FL-YB. FL-YB cells efficiently enhanced viability of cocultured mouse B cells in a BAFF-dependent fashion. Interestingly, we found that addition of IL-21, a major Tfh cytokine, readily induced death of B cells that were cocultured with FL-YB cells, whereas IL-21 alone sustained viability of B cells in the absence of FL-YB cells. The IL-21-induced death was dependent on a low m.w. soluble factor that was released from FL-YB cells, which was finally identified as PGE(2). Treatment of B cells with IL-21 plus PGE(2), but not either alone, resulted in enhanced expression of a proapoptotic protein Bim and the upstream transcription factor Foxo1. A PGE(2) receptor isoform, EP4, was responsible for IL-21/PGE(2)-induced B cell death. Thus, PGE(2) is an endogenous chemical mediator that can switch pleiotropic actions of IL-21 on B cells. IL-21/PGE(2)-induced B cell death was rescued if B cells were costimulated via CD40. In immunized mice, deficiency of IL-21R in B cells led to a significant decrease in the frequency of activated caspase-3-positive GC B cells concomitant with impaired affinity maturation of Abs. Taken together, results implicate a physiological role of IL-21/PGE(2)-induced B cell death in GC B cell selection. The Journal of Immunology, 2011, 187: 4210-4218.

    DOI: 10.4049/jimmunol.1100934

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  • Efficient affinity maturation of antibodies in an engineered chicken B cell line DT40-SW by increasing point mutation 査読

    Masamichi Kajita, Takahiro Okazawa, Mika Ikeda, Kagefumi Todo, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING   110 ( 3 )   351 - 358   2010年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC BIOSCIENCE BIOENGINEERING JAPAN  

    The chicken B cell line DT40 undergoes hypermutation of immunoglobulin variable region (IgV) genes during culture, thereby constituting an antibody (Ab) library. We previously established an in vitro Ab generation system using an engineered line DT40-SW whose hypermutation machinery can be switched on and off. Abs for various antigens (Ags) can be obtained from the DT40-SW library and the specificity of the Ag-specific clones can be stabilized by stopping hypermutation. Furthermore, the affinity of obtained monoclonal Abs (mAbs) can be improved through further mutation followed by selection, a process analogous to "affinity maturation" that occurs in vivo. Although gene conversion dominantly diversifies the IgV genes in DT40 cells, point mutation is considered to be more favorable for fine-tuning Ab properties during affinity maturation. Here, we examined whether affinity maturation occurs more efficiently when the hypermutation pattern was transformed from gene conversion into point mutation in DT40-SW cells. To this end, we disrupted the XRCC3 gene that is essential for gene conversion. It was found that hemizygous disruption of the XRCC3 gene was sufficient to increase the point mutation frequency. Since hemizygous disruption is conducted more easily, we tested whether the XRCC3 (+/-) mutant generates high-affinity Abs through affinity maturation more efficiently than the wild type. Using this affinity maturation technique, we generated an improved 4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl-specific mAb with similar to 600-fold lower K(D)) than that of the original mAb. Taken together, hemizygous disruption of the XRCC3 gene is considered to be useful for obtaining high-affinity mAbs from DT40-SW cells though affinity maturation. (C) 2010, The Society for Biotechnology, Japan. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.jbiosc.2010.03.006

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  • Enhancement of hypermutation frequency in the chicken B cell line DT40 for efficient diversification of the antibody repertoire 査読

    Masaki Magari, Yuichi Kanehiro, Kagefumi Todo, Mika Ikeda, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS   396 ( 2 )   353 - 358   2010年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE  

    Chicken B cell line DT40 continuously accumulates mutations in the immunoglobulin variable region (IgV) gene by gene conversion and point mutation, both of which are mediated by activation-induced cytidine deaminase (AID), thereby producing an antibody (Ab) library that is useful for screening monoclonal Abs (mAbs) in vitro. We previously generated an engineered DT40 line named DT40-SW, whose AID expression can be reversibly switched on or off, and developed an in vitro Ab generation system using DT40-SW cells. To efficiently create an Ab library with sufficient diversity, higher hypermutation frequency is advantageous. To this end, we generated a novel cell line DT40-SW Delta C, which conditionally expresses a C-terminus-truncated AID mutant lacking the nuclear export signal. The transcription level of the mutant AID gene in DT40-SW Delta C cells was similar to that of the wild-type gene in DT40-SW cells. However, the protein level of the truncated AID mutant was less than that of the wild type. The mutant protein was enriched in the nuclei of DT40-SW Delta C cells, although the protein might be highly susceptible to degradation. In DT40-SW Delta C cells, both gene conversion and point mutation occurred in the IgV gene with over threefold higher frequency than in DT40-SW cells, suggesting that a lower level of the mutant AID protein was sufficient to increase mutation frequency. Thus, DT40-SW Delta C cells may be useful for constructing AID libraries for efficient screening of mAbs in vitro. (C) 2010 Elsevier Inc. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.bbrc.2010.04.096

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  • Conditional transformation of immunoglobulin mutation pattern from gene conversion into point mutation by controlling XRCC3 expression in the DT40 B cell line 査読

    Masamichi Kajita, Masaki Magari, Kagefumi Todo, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING   109 ( 4 )   407 - 410   2010年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC BIOSCIENCE BIOENGINEERING JAPAN  

    A hypermutating B cell line DT40 is useful for screening antibodies and improving affinity of the selected antibodies in vitro. To perform affinity maturation efficiently, we generated an engineered DT40 line whose immunoglobulin mutation pattern can be transformed from gene conversion into point mutation by conditional suppression of XRCC3 expression. (C) 2009, The Society for Biotechnology, japan. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.jbiosc.2009.09.050

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  • Enhancement of antibody production from a chicken B cell line DT40 by reducing Pax5 expression 査読

    Masaki Magari, Takahiro Aya, Mika Ikeda, Kagefumi Todo, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING   107 ( 2 )   206 - 209   2009年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC BIOSCIENCE BIOENGINEERING JAPAN  

    We developed a novel in vitro antibody (Ab) generation system using a hypermutating chicken B cell line (DT40-SW). We suppressed the expression of the Pax5 transcription factor by targeted disruption of the gene to increase Ab production in isolated clones and produce the desired Abs. This single genetic manipulation resulted in a significant enhancement of Ab production without significantly affecting maximum cell density. (C) 2008, The Society for Biotechnology, Japan. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.jbiosc.2008.09.014

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  • Creation of Valuable Antibodies by an In Vitro Antibody Generation System Using a Hypermutating B Cell Line 査読

    Naoki Kanayama, Kagefumi Todo, Masaki Magari, Hitoshi Ohmori

    YAKUGAKU ZASSHI-JOURNAL OF THE PHARMACEUTICAL SOCIETY OF JAPAN   129 ( 1 )   11 - 17   2009年1月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:PHARMACEUTICAL SOC JAPAN  

    Monoclonal antibodies (mAb) have recently proven to be excellent biopharmaceutical agents. The generation of hybridomas from antigen-stimulated B cells has been a key technology for obtaining mAbs; however, it is a laborious and time-consuming process, and sometimes mAbs for molecules conserved between species are difficult to obtain because of immunological tolerance. Thus, it is of great importance to develop in vitro technologies for generating useful Abs as drug candidates. We have been attempting to develop a novel in vitro antibody generation system using a chicken B cell line DT40, which displays Abs and mutates Ig genes during Culture, thereby generating a useful Ab library for screening mAbs. First, we generated an engineered cell line DT40-SW whose mutation machinery can be reversibly switched on and off. The Ab generation system using DT40-SW is useful in the following ways: (1) mAbs for various model antigens including antoantigens can be obtained from the DT40-SW Ab library that is free from immunological tolerance; (2) the switching device of the mutation machinery enables fixing desirable Ig mutants by stopping mutation; (3) by repeated culture and sorting of clones bearing higher affinity for target antigens, affinity maturation can be mimicked in vitro. We have also genetically improved DT40-SW cells for mutation efficiency and Ab production. The Ab generation system will be applicable for obtaining valuable Abs such as antitumor Abs.

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  • 高親和性抗体の産生機構に関する研究とその工学的応用:平成20年度生物工学奨励賞(斎藤賞) 招待 査読

    金山直樹

    生物工学会誌   87 ( 3 )   116 - 122   2009年

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    記述言語:日本語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)  

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  • Analysis of B cell selection in the germinal center reaction during a T-dependent antibody response at a single cell level 査読

    Takahiro Okazawa, Masaki Magari, Takafumi Kimoto, Emi Kouyama, Hitoshi Ohmori, Naoki Kanayama

    IMMUNOLOGY LETTERS   117 ( 1 )   96 - 105   2008年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    The quasimonoclonal mouse is useful to examine B cell selection during T-dependent antibody (Ab) responses because of its limited B cell populations mainly expressing the knockin 17.2.25 V-H-encoded H chain (VHT) paired with the lambda 1 or lambda 2 L chain. It has been reported that both two VHT/lambda 1 and VHT/lambda 2 B cell populations responded to a T-dependent antigen conjugated with a hapten p-nitrophenylacetyl (pNP), but only VHT/lambda 2 B cells differentiated to secrete high affinity anti-pNP IgG Abs by acquiring a critical mutation (T313A) in the VHT. The VHT/lambda 2 B cells may be more potent in migrating to the germinal centers (GCs) due to about 50-fold higher affinity for pNP than VHT/lambda 1 B cells. Here, to uncover how VHT/lambda 2 B cells were preferentially recruited for affinity maturation during the anti-pNP Ab response, we examined the L chain usage and mutation frequency of VHT+ GC B cells at a single cell level. VHT/lambda 2 B cells bearing the unmutated VHT gene were found in the GCs more frequently than VHT/lambda 1 and mutated VHT/lambda 2 counterparts in an early phase of the Ab response. In the course of the GC reaction, the number of VHT/lambda 2 B cells that mutated their VHT genes preferentially expanded, and finally VHT/lambda 2 B cells bearing the T313A mutation occupied VHT+ GC B cell population. Thus, it is suggested that B cells with a higher affinity were selected not only for entry to the GCs but also in the affinity maturation process during a T-dependent Ab response. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.imlet.2008.01.002

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  • Analysis of antigen-stimulated B cell migration into germinal centers during the early stage of a T-dependent immune response 査読

    Emi Kouyama, Yumiko Nishikawa, Takahiro Okazawa, Masaki Magari, Hitoshi Ohmori, Naoki Kanayama

    IMMUNOLOGY LETTERS   109 ( 1 )   28 - 35   2007年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    The quasimonoclonal (QM) mouse provides a model to analyze B cell selection because major B cell antigen receptors (BCR) are composed of the knockin V(H)DJ(H) 17.2.25 (VHT) encoded H chain and the lambda 1 or lambda 2 L chain, thereby being specific for (4-hydoxy-3-nitrophenyl)acetyl (NP). We have reported that during a T-dependent antibody (Ab) response for a low-affinity NP analog p-nitrophenylacetyl (pNP), although VHT/lambda 1 and VHT/lambda 2 IgM were equally produced, VHT/lambda 2 IgG almost exclusively underwent affinity maturation toward pNP. The initial affinity of VHT/lambda 2 B cells for pNP was approximately 50-100-fold higher than that of VHT/lambda 1 B cells, suggesting a role of BCR affinity in recruiting B cells to affinity maturation processes. Here, we investigated whether the intensity of BCR signals could contribute to the selection of VHT/lambda 2 B cells for affinity maturation. VHT/lambda 2 B cells were more responsive to pNP than VHT/lambda 1 B cells in vitro. When CFSE-labeled QM B cells were transferred into the wild type mice where T cells had been primed with chicken gamma-globulin (CGG), QM B cells challenged by pNP-conjugated CGG could be observed to get activated and migrate to GCs in the early phase of the T-dependent response to pNP-CGG. Adoptive transfer of sorted populations revealed that the VHT/lambda 2 B cell population was more potent in migration into GCs than the VHT/lambda 1 counterpart. Thus, it is suggested that the higher BCR affinity of VHT/lambda 2 B cells may be an initial cue for their recruitment to GCs during a T-dependent Ab response. (c) 2007 Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.imlet.2006.12.011

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  • Novel in vitro screening system for monoclonal antibodies using hypermutating chicken B cell library 査読

    Kagefumi Todo, Kenji Miyake, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING   102 ( 5 )   478 - 481   2006年11月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC BIOSCIENCE BIOENGINEERING JAPAN  

    Here, we report an in vitro screening system for monoclonal antibodies using a hypermutating chicken B cell line, DT40-SW. When switching on hypermutation, cultured DT40-SW cells constituted an antibody library, from which clones secreting antibodies to a test antigen were successfully isolated, and genetically stabilized by switching off the mutation machinery.

    DOI: 10.1263/jbb.102.478

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  • Establishment of lymphotoxin beta receptor signaling-dependent cell lines with follicular dendritic cell phenotypes from mouse lymph nodes 査読

    Yumiko Nishikawa, Masaki Hikida, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Masaharu Mori, Hiroshi Kitamura, Tomohiro Kurosaki, Hitoshi Ohmori

    JOURNAL OF IMMUNOLOGY   177 ( 8 )   5204 - 5214   2006年10月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS  

    Follicular dendritic cells (FDCs) have been shown to play a crucial role in the positive selection of high-affinity B cells that are generated by somatic hypermutation in germinal center (GC). Because of technical difficulties in preparing and maintaining pure FDCs, a role for FDCs in this complicated process has not been fully elucidated. In this study, we established a cell line designated as pFL that retained major FDC phenotypes from a three-dimensional culture of mouse lymph node cells. pFL cells proliferated slowly in response to an agonistic anti-lymphotoxin beta receptor mAb and TNF-alpha. A more rapidly growing clone, named FL-Y, with similar requirements for growth was isolated from a long-term culture of pFL. Analysis of surface markers in these two cell lines by immunostaining, flow cytometry, and DNA microarray revealed the expression of genes, including those of CD21, Fc gamma RIIB, lymphotoxin beta receptor, ICAM-1, VCAM-1, IL-6, and C4, which have been shown to be characteristic of FDCs. In addition, B cell-activating factor was expressed in these two cell lines. At the pFL or FL-Y:B cell ratio of 1:100, the cell lines markedly sustained B cell survival and Ab production during 2 wk of culture, while most B cells collapsed within 1 wk in the absence of the FDC-like cells. Interestingly, expression of typical GC markers, Fas and GL-7, was notably augmented in B cells that were cocultured with Th cells on these two cell lines. Thus, pFL and FL-Y cells may be useful for providing insight into the functional role for FDCs in GC.

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  • Suppressive effects of mometasone furoate on an antigen-specific IgE antibody response and production of IL-4 in mice 査読

    Masaki Magari, Mika Ikeda, Miki Asakura, Naoki Kanayama, Masami Ogawa, Hitoshi Ohmori

    IMMUNOPHARMACOLOGY AND IMMUNOTOXICOLOGY   28 ( 3 )   491 - 500   2006年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:TAYLOR & FRANCIS INC  

    A nasal formulation of mometasone furoate (MF) is advantageous in avoiding systemic activity characteristic of glucocorticoids when it is applied topically. To confirm anti-allergic effects of this glucocorticoid formulation elaborately, we investigated whether the drug can suppress the production of IgE antibodies and related cytokines. It we showed that IgE production induced in mice immunized via intranasal route was significantly reduced when the mice were administered MF intranasally. Further, MF was effective in inhibiting production of type-2 helper T cell cytokines in vivo and in vitro. These results provide a immunopharmacological basis for clinical efficacy of this drug.

    DOI: 10.1080/08923970600928155

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  • Genetic manipulation of an exogenous non-immunoglobulin protein by gene conversion machinery in a chicken B cell line 査読

    N Kanayama, K Todo, S Takahashi, M Magari, H Ohmori

    NUCLEIC ACIDS RESEARCH   34 ( 2 )   2006年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:OXFORD UNIV PRESS  

    During culture, a chicken B cell line DT40 spontaneously mutates immunoglobulin (Ig) genes by gene conversion, which involves activation-induced cytidine deaminase (AID)-dependent homologous recombination of the variable (V) region gene with upstream pseudo-V genes. To explore whether this mutation mechanism can target exogenous non-Ig genes, we generated DT40 lines that bears a gene conversion substrate comprising the green fluorescent protein (GFP) gene as a donor and the blue fluorescent protein (BFP) gene as an acceptor. A few percent of the initially BFP-expressing cells converted their fluorescence from blue to green after culture for 2-3 weeks when the substrate construct was integrated in the Ig light chain locus, but not in the ovalbumin locus. This was the result of AID-dependent and the GFP gene-templated gene conversion of the BFP gene, thereby leading to the introduction of various sizes of GFP-derived gene segment into the BFP gene. Thus, G/B construct may be used to visualize gene conversion events. After switching off AID expression in DT40 cells, the mutant clones were isolated stably and maintained with their mutations being fixed. Thus, the gene conversion machinery in DT40 cells will be a useful means to engineer non-Ig proteins by a type of DNA shuffling.

    DOI: 10.1093/nar/gnj013

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  • Immunogenicity of an inflammation-associated product, tyrosine nitrated self-proteins 査読

    H Ohmori, N Kanayama

    AUTOIMMUNITY REVIEWS   4 ( 4 )   224 - 229   2005年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    To understand the mechanism leading to autoantibody production; it is of importance to reveal how self-components that are otherwise inactive as antigens acquire immunogenicity. One possible mechanism is the generation of structurally modified self-proteins in apoptotic or inflamed tissues. The post-translational modification of proteins might give rise to the generation. of new epitopes to which T and B lymphocytes are not rendered tolerant. Among the protein modifications; this review is focussed on the generation and the immunogenicity of self-proteins carrying 3-nitrotyrosine (NT), an inflammation-associated marker. NT proteins are generated in vivo by nitration with peroxynitrite, which is formed from nitric oxide and superoxide that are released from activated inflammatory cells. Interestingly, many anti-DNA Abs from autoimmune mice have been shown cross-reactive with NT. Analysis of the immunogenicity of NT-carrying self-proteins has revealed that they elicit both Immoral and cellular immune responses in mice. Thus, NT containing epitopes created on self-proteins may serve as a trigger to impair or bypass immunological tolerance. (c) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.autrev.2004.11.011

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  • Reversible switching of immunoglobulin hypermutation machinery in a chicken B cell line 査読

    N Kanayama, K Todo, M Reth, H Ohmori

    BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS   327 ( 1 )   70 - 75   2005年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE  

    A chicken B lymphoma line, DT40, hypermutates immunoglobulin (Ig) genes spontaneously during culture. Thus, cultured DT 40 cells constitute a useful Ig library for screening antibodies(Abs) in vitro. To fix desirable Ig mutants by stopping hypermutation or to resume mutation for further improvement of Ab affinity, activation-induced cytidine deaminase (AID), a key enzyme responsible for the Ig mutation machinery, must be switched on or off. To this end, we generated a DT40 line whose one AID allele was disrupted, and the other allele was replaced by the loxP-flanked AID construct. In this engineered cell line designated as DT40-SW, AID expression could be switched reversibly by tamoxifen-regulated Cre recombinase. Devices were also introduced to discriminate between the "AID-ON" and the "AID-OFF" cells by GFP expression and puromycin resistance, respectively. Starting from a single DT40-SW cell, Ig gene repertoire was efficiently diversified during culture only when AID expression was on. (C) 2004 Elsevier Inc. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.bbrc.2004.11.143

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  • Analysis of marginal zone B cell development in the mouse with limited B cell diversity: Role of the antigen receptor signals in the recruitment of B cells to the marginal zone 査読

    N Kanayama, M Cascalho, H Ohmori

    JOURNAL OF IMMUNOLOGY   174 ( 3 )   1438 - 1445   2005年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS  

    The quasimonoclonal (QM) mouse provides an intelligible model to analyze the B cell selection as the competition between two major 4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl-specific B cell populations whose BCR are comprised of the knockin V(H)17.2.25 (VHT)encoded H chain and the lambda1 or lambda2 L chain. In this study, we show the QM system is useful to examine how BCR signals guide a subset of B cells to the marginal zone (MZ). Compared with the control C57BL/6 mice, the QM mice had similar to2.7-fold increased number of B cells exhibiting the MZ B cell phenotype and a larger MZ area in the spleen. Interestingly, VHT/lambda2 B cells significantly predominated over VHT/lambda1 B cells in MZ-(VHT/lambda1:VHT/lambda2 approximate to 3:7) and transitional 2-B cell subsets, while these two populations were comparable in immature, transitional 1, and mature counterparts. Thus, the biased use of lambda2 in the MZ B cells may be the result of selection in the periphery. The enlargement of MZ B cell compartment and the preferred recruitment of the VHT/(lambda)2 B cells were further augmented by doubling the VHT gene, but dampened by the dysfunction of Bruton's tyrosine kinase, suggesting a positive role of BCR signaling in this selection. Comparison of Ag specificity between VHT/lambda1 and VHT/lambda2 IgM mAbs revealed a polyreactive nature of the VHT/lambda2 BCR, including the reactivity with ssDNA. Taken together, it is suggested that polyreactivity (including self-reactivity) of BCR is crucial in driving B cells to differentiate into the MZ phenotype.

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  • Immunogenicity of autologous IgG bearing the inflammation-associated marker 3-nitrotyrosine 査読

    H Ohmori, M Oka, Y Nishikawa, H Shigemitsu, M Takeuchi, M Magari, N Kanayama

    IMMUNOLOGY LETTERS   96 ( 1 )   47 - 54   2005年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    To explore the link between inflammation and autoimmunity, we analyzed the immunogenicity of 3-nitrotyrosine(NT)-bearing self-proteins, an inflammation-associated marker that is formed by nitration of protein tyrosine residues with peroxynitrite generated during inflammation. An interesting feature of NT is its structural similarity to a synthetic hapten, 4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl (NP), with which some anti-DNA antibodies (Abs) have been reported to show cross-reactivity. We confirmed that some of anti-DNA monoclonal Abs (mAbs) obtained from MRL/lpr mice also bound NT as well as NP. Based on these findings, we examined whether NIT-bearing autologous IgG (NT-1gG) as a model of NT-self proteins is immunogenic to induce a DNA-cross-reactive anti-NT Ab response in autologous normal mice. Anti-NT IgM and IgG Ab responses were elicited after the third immunization with NT-IgG. concomitant with an increase in anti-single stranded (ss)DNA titer. Interestingly, a part of anti-NT mAbs thus induced showed cross-reactivity with ssDNA. some of which used VH sequences that were highly homologous to those reported in anti-DNA Abs from NZB/WF1 mice. Splenic T cells primed with NT-IgG. but not with unmodified IgG. showed a proliferative response to the inducing antigen. Collectively, NT-IgG is immunogenic in autologous hosts. and can induce anti-NT Abs that are cross-reactive with ssDNA. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/j.imlet.2004.07.004

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  • Generation of IgM and IgG1 monoclonal antibodies with identical variable regions: comparison of avidity

    Naoki Kanayama, Kimi Yamakoshi, Masaaki Kiyomi, Masaki Magari, Hitoshi Ohmori

    Memoirs of the Faculty of Engineering Okayama University   38   91 - 96   2004年

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  • Up-regulation of the peroxisomal beta-oxidation system occurs in butyrate-grown Candida tropicalis following disruption of the gene encoding peroxisomal 3-ketoacyl-CoA thiolase 査読

    M Ueda, N Kanayama, N Kamasawa, M Osumi, A Tanaka

    BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR AND CELL BIOLOGY OF LIPIDS   1631 ( 2 )   160 - 168   2003年3月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    In the yeast Candida tropicalis, two thiolase isozymes, peroxisomal acetoacetyl-CoA thiolase and peroxisomal 3-ketoacyl-CoA thiolase, participate in the peroxisomal fatty acid p-oxidation system. Their individual contributions have been demonstrated in cells grown on butyrate, with C. tropicalis able to grow in the absence of either one. In the present study, a lack of peroxisomal 3-ketoacyl-CoA thiolase protein resulted in increased expression (up-regulation) of acetoacetyl-CoA thiolase and other peroxisomal proteins, whereas a lack of peroxisomal acetoacetyl-CoA thiolase produced no corresponding effect. Overexpression of the acetoacetyl-CoA thiolase gene did not suppress the up-regulation or the growth retardation on butyrate in cells without peroxisomial 3-ketoacyl-CoA thiolase, even though large amounts of the overexpressed acetoacetyl-CoA thiolase were detected in most of the peroxisomes of butyrate-grown cells. These results provide important evidence of the greater contribution of 3-ketoacyl-CoA thiolase to the peroxisomal beta-oxidation system than acetoacetyl-CoA thiolase in C tropicalis and a novel insight into the regulation of the peroxisomal beta-oxidation system. (C) 2003 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/S1388-1981(03)00002-7

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  • Mechanisms leading to autoantibody production: Link between inflamation and antoimmunity

    Hitoshi Ohmori, Naoki Kanayama

    Current Drug Targets-Inflamation & Allergy   2   232 - 241   2003年

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  • B cell selection and affinity maturation during an antibody response in the mouse with limited B cell diversity 査読

    N Kanayama, T Kimoto, K Todo, Y Nishikawa, M Hikida, M Magari, M Cascalho, H Ohmori

    JOURNAL OF IMMUNOLOGY   169 ( 12 )   6865 - 6874   2002年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER ASSOC IMMUNOLOGISTS  

    The quasi-monoclonal mouse has limited B cell diversity, whose major (similar to80%) B cell Ag receptors are comprised of the knockin V-H 17.2.25 (VHT)-encoded H chain and the lambda1 or lambda2 L chain, thereby being specific for 4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl. The p-nitrophenylacetyl (pNP) was found to be a low affinity analog of nitrophenylacetyl. We examined affinity maturation of anti-pNP IgG by analyzing mAbs obtained from quasi-monoclonal mice that were immunized with this low affinity Ag. The results are: 1) Although VHT/lambda1 and VHT/lambda2 IgM were equally produced, VHT/lambda2 IgG almost exclusively underwent affinity maturation toward pNP. 2) A common mutation in complementarity-determining region 3 Of VHT (T313A) mainly contributed to generating the specificity for pNP. 3) Because mutated VHT-encoded gamma-chains could form lambda1-bearing IgG in Chinese hamster ovary cells, apparent absence of VHT/lambda1 anti-pNP IgG may not be due to the incompatibility between the gamma-chains and the lambda1-chain, but may be explained by the fact that VHT/lambda1 B cells showed 50- to 100-fold lower affinity for pNP than VHT/lambda2 B cells. 4) Interestingly, a pNP-specific IgM mAb that shared common mutations including T313A with high affinity anti-pNP IgG was isolated, suggesting that a part of hypermutation coupled with positive selection can occur before isotype switching. Thus, even weak B cell receptor engagement can elicit an IgM response, whereas only B cells that received signals stronger than a threshold may be committed to an,affinity maturation process.

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  • Role for complement receptors (CD21/CD35) in the regulation of recombination activating gene expression in murine peripheral B cells 査読

    H Ohmori, M Magari, Y Nakayama, N Kanayama, M Hikida

    IMMUNOLOGY LETTERS   83 ( 2 )   95 - 99   2002年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    A population of peripheral B cells have been shown to express recombination activating gene products, RAG-1 and RAG-2, which are considered to be involved in revising the B cell antigen receptor (BCR) in the periphery. BCR engagement has been reported to turn off RAG expression in peripheral B cells, whereas the same treatment has an opposite effect on immature B cells in the bone marrow. In contrast to receptor editing that is involved in the removal of autoreactivity in immature B cells, it has been shown that secondary V(D)J rearrangement in peripheral B cells, termed receptor revision, contributes to affinity maturation of antibodies. Here, we show that RAG-2 expression in murine splenic B cells was abrogated by the coligation of BCR with complement receptors (CD21/CD35) much more efficiently than by the engagement of BCR alone. On the other hand, the same coligation augmented proliferation of anti-CD40-stimulated B cells. These findings suggest a crucial role for CD21/CD35 in directing the conservation or the revision of BCRs in peripheral B cells. (C) 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/S0165-2478(02)00083-4

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  • Contribution of light chain rearrangement in peripheral B cells to the generation of high-affinity antibodies 査読

    M Magari, T Sawatari, Y Kawano, M Cascalho, M Wabl, N Kanayama, M Hikida, H Ohmori

    EUROPEAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY   32 ( 4 )   957 - 966   2002年4月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-V C H VERLAG GMBH  

    Recently, peripheral B cells have been shown to undergo secondary V(D)J rearrangement of immunoglobulin genes, but the physiological role of this event has not been fully elucidated. To investigate whether rearrangement of L chain genes in the periphery is involved in the generation of high-affinity antibodies (Ab), we used the 17.2.25 rearranged VHDJH gene (VHT)-knockin mouse whose B cell diversity is limited due to the expression of the site-directed transgene. Immunization of the mouse with p-nitrophenylacetyl (pNP)-conjugated chicken gamma-globulin preferentially led to the production of anti-pNP IgG Ab comprised of non-VHT-encoded H chains and lambda chains. lambda(+) IgG constituted a majority of high-affinity Ab to this hapten. RAG-2 mRNA and the recombination signal sequence break of the lambda1 gene increased in the draining lymph node of immunized mice, but not of nonimmunized animals. There was a close correlation between the levels of these parameters implicating X, gene rearrangement and the production of lambda(+) high-affinity anti-pNP IgG. These observations were reproduced in RAG-1-deficient mice that were reconstituted with the spleen cells of the knockin mouse. Thus, our findings suggest that L chain rearrangement that occurs in the periphery can contribute to affinity maturation of Ab.

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  • Regulatory role for complement receptors (CD21/CD35) in the recombination activating gene expression in mouse peripheral B cells

    Masaki Hikida, Masaki Magari, Yasunori Nakayama, Naoki Kanayama, Hitoshi Ohmori

    Memoirs of the Faculty of Engineering Okayama Univiersity   36   51 - 60   2002年3月

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  • Use of secondarily revised VH genes in IgE antibodies produced in mice infected with the nematode Nippostrongylus brasiliensis 査読

    N Kanayama, C Hukue, M Magari, K Ohtani, M Hikida, M Yamada, S Matsuda, H Ohmori

    IMMUNOLOGY LETTERS   77 ( 3 )   181 - 186   2001年7月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Although a high level of IgE is produced after primary infection with Nippostrongylus brasiliensis (Nb), most of the IgE antibodies (Abs) are not specific to the worm. Analyses with Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) revealed that the IgE Abs from Nb-infected BALB/c mice did not show reactivity with Nb-derived excretory-secretory proteins (NES) and antigens present in the cell-free extracts of the worm. Monoclonal IEE Abs obtained from the Nb-infected mice were not reactive with these Nb antigen either. To characterize Nb-induced IgE response, we used (QM x C57BL/6)F1 (QBF1) mice that bear the knock-in 17.2.25 VHDJH segment (VHT) encoding a VH region specific to 4-hydroxy-3-nitrophenylacetyl hapten, and express VHT-encoded antigen receptors on 80-85% of their B cells. Consistent with the frequency of VHT-positive B cells, more than 80% of IgE Abs induced in QBF1 B cells that were cultured with LPS plus IL-4 were found to bear VHT-encoded H chains. In contrast, when QBF1 mice were infected with Nb, less than 10% of Nb-induced IgE Abs were found to use VHT. The QBF1-derived IgE did not react with Nb antigens either. Taken together, data suggest that Nb-induced IgE response in mice is not merely the result of polyclonal activation of B cells, but may involve a mechanism that revises Ig genes secondarily. (C) 2001 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/S0165-2478(01)00216-4

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  • Restoration of immunocyte functions by thymosin alpha 1 in cyclophosphamide induced immunodeficient mice 査読

    H Ohmori, M Kamo, K Yamakoshi, MHM Nitta, M Hikida, N Kanayama

    IMMUNOPHARMACOLOGY AND IMMUNOTOXICOLOGY   23 ( 1 )   75 - 82   2001年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:MARCEL DEKKER INC  

    Thymosin alpha1 (T alpha1) is an oligopeptide hormone originally isolated from the thymus gland, and has been reported to have stimulating effects on the differentiation of T cells and NK cells. These immunostimulating properties have been considered to be useful for improving immune disorders associated with various diseases including cancer, AIDS and hepatitis. Here, we characterized immunostimulating properties of Tal in experimental immunodeficiency of mice that was induced by the administration of cyclophosphamide (CY). Repeated injection of 30-300 mug/kg/day of Tal after CY-treatment significantly accelerated the restoration of the reduced number of CD4(+)CD8(+) T cells in the thymus. T alpha1 administration was effective in restoring the suppressed activities of helper T cells and cytotoxic T cells in CY-treated mice. Tal also had stimulating effects on reduced activity of lymphokine-activated killer cells in CY-treated mice. These results indicate that T alpha1 is stimulatory for both humoral and cellular immune responses, thus providing the immunological basis for the clinical benefit of this compound.

    DOI: 10.1081/IPH-100102569

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  • Prevention of collagen-induced arthritis in DBA/1 mice by oral administration of AZ-9, a bacterial polysaccharide from Klebsiella oxytoca 査読

    R Sugihara, M Yoshimura, M Mori, N Kanayama, M Hikida, H Ohmori

    IMMUNOPHARMACOLOGY   49 ( 3 )   325 - 333   2000年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Collagen-induced arthritis (CIA) is an excellent model of rheumatoid arthritis (RA) in humans that is induced in DBA/1 mice immunized with bovine type II collagen (CII). Here, we report that the induction of CIA was effectively suppressed by oral administration of AZ-9, a purified polysaccharide with the average molecular weight of approximately 200 kDa that was produced by a soil bacterium, Klebsiella oxytoca. When AZ-9 was administered at 125-250 mg/kg/day orally for 9 consecutive days after immunization with CII followed by its administration every 3 days, resulted in a marked reduction of the incidence and the severity of CIA. The serum level of anti-CII IgG2a and the production of IFN-gamma and IL-12 in the draining lymph node (LN) cells were significantly lower in AZ-9-administered mice than the untreated control. These findings suggest that orally administered AZ-9 suppressed CIA through attenuating a Th1-type response to CII. AZ-9 could be fragmented into smaller molecules (3-4 kDa) without losing its suppressive activity. (C) 2000 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/S0162-3109(00)00247-2

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  • An n-alkane-responsive promoter element found in the gene encoding the peroxisomal protein of Candida tropicalis does not contain a C-6 zinc cluster DNA-binding motif 査読

    T Kanai, A Hara, N Kanayama, M Ueda, A Tanaka

    JOURNAL OF BACTERIOLOGY   182 ( 9 )   2492 - 2497   2000年5月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC MICROBIOLOGY  

    When an asporogenic diploid yeast, Candida tropicalis, is cultivated on n-alkane, the expression of the genes encoding enzymes of the peroxisomal beta-oxidation pathway is highly induced. An upstream activation sequence (UAS) which can induce transcription in response to n-alkane (UAS(ALK)) was identified on the promoter region of the peroxisomal 3-ketoacyl coenzyme A (CoA) thiolase gene of C. tropicalis (CT-T3A). The 29-bp region (from -289 to -261) present upstream of the TATA sequence was sufficient to induce n-alkane-dependent expression of a reporter gene. Besides n-alkane, UAS(ALK)-dependent gene expression also occurred in the cells grown on oleic acid. Several kinds of mutant UAS(ALK) were constructed and tested for their UAS activity, It was clarified that the important nucleotides for UAS(ALK) activity were located within 10-bp region from -273 to -261 (5'-TCCTGCACAC-3'). This region did not contain a CGG triplet and therefore differed from the sequence of the oleate-response element (ORE), which is a UAS found on the promoter region of 3-ketoacyl-CoA thiolase gene of Saccharomyces cerevisiae. Similar sequences to UAS(ALK) were also found on several peroxisomal enzyme encoding genes of C. tropicalis.

    DOI: 10.1128/JB.182.9.2492-2497.2000

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  • Selective augmenting effects of nitric oxide on antigen-specific IgE response in mice 査読

    H Ohmori, H Egusa, N Ueura, Y Matsumoto, N Kanayama, M Hikida

    IMMUNOPHARMACOLOGY   46 ( 1 )   55 - 63   2000年1月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    Here, we report the enhancing effects of nitric oxide (NO) on an IgE antibody response in mice. Anti-trinitrophenyl (TNP) IgE production induced in vitro in TNP keyhole Limpet hemocyanin (KLH)-primed spleen cells was inhibited by approximately 70% when an NO synthase (NOS) inhibitor, L-N-G-monomethyl-L-arginine, was added at 10(-7)-10(-6) M to the lymphocyte culture. On the other hand, addition of NO-generating agents to the culture resulted in a marked enhancement of the IgE production. In contrast, anti-TNP IgM and IgG1 responses were affected only marginally when the IEE production was either suppressed or augmented by these agents. NO did not directly augment IgE class switching in normal B cells stimulated with lipopolysaccharide and interleukin (IL)-4. NO-mediated augmentation of the IgE response is considered to be of a physiological significance because administration of aminoguanidine (AG), an inhibitor of inducible NOS, to immunized mice resulted in a preferential suppression of anti-TNP IgE production in vivo. This may be explained by the observation that AG-administration increased interferon-gamma expression without changing that of IL-4 in the immunized mice. Taken together, these observations suggest a pathophysiological role of NO in the development of IEE-mediated allergic diseases. (C) 2000 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

    DOI: 10.1016/S0162-3109(99)00158-7

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  • Genetic Evaluation of Peroxisomal and Cytosolic Acetoacetyl-CoA Thiolase Isozymes in n-Alkane-Assimilating Diploid Yeast, Candida tropicalis 査読

    Mitsuyoshi Ueda, Naoki Kanayama, Atsuo Tanaka

    Cell Biochemistry and Biophysics   32   285 - 290   2000年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:Humana Press  

    The n-alkane-assimilating diploid yeast, Candida tropicalis, possesses two acetoacetyl-CoA thiolase (Thiolase I) isozymes encoded by one allele: peroxisomal and cytosolic Thiolase Is encoded by both CT-T1A and CT-T1B. To clarify the function of peroxisomal and cytosolic Thiolase Is, the site-directed mutation leading Thiolase I ΔC6 without a putative C-terminal peroxisomal targeting signal was introduced on CT-T1A locus in the ct-t1bΔ-null mutant. The C-terminus-truncated Thiolase I was active and solely present in the cytosol. Although the ct-t1aΔ/t1bΔ-null mutants showed mevalonate auxotrophy, the mutants having the C-terminus-truncated Thiolase I did not require mevalonate for growth, as did the strains having cytosolic Thiolase I. These results demonstrate that the presence of Thiolase I in the cytoplasm is indispensable for the sterol synthesis in this yeast. It is of greater interest that peroxisomal and cytosolic Thiolase I isozymes, products of the same genes, play different roles in the respective compartments, although further investigations will be necessary to analyze how to be sorted into peroxisomes and the cytosol.

    DOI: 10.1385/CBB:32:1-3:285

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  • Construction of an autonomously replicating plasmid in n-alkane-assimilating yeast, Candida tropicalis 査読

    A Hara, M Ueda, T Matsui, K Furuhashi, N Kanayama, A Tanaka

    JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING   87 ( 6 )   717 - 720   1999年6月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC BIOSCIENCE BIOENGINEERING JAPAN  

    A transformation system using the autonomously replicating plasmid in the n-alkane-assimilating and asporogenic diploid yeast, Candida tropicalis, was developed. For the cloning of a DNA fragment containing a potential autonomously replicating sequence (ARS) from the genomic DNA of C. tropicalis, the ura3 mutant obtained using ethylmethane sulfonate as the host and the URA3 gene amplified by PCR using the C. tropicalis genomic DNA as a selectable marker were prepared. Comparison of ARSs among yeasts revealed that the consensus sequence found in S. cerevisiae was also present in C. tropicalis. The autonomously replicating plasmid containing the putative ARS as the shuttle vector, capable of replicating in both E. coli and C. tropicalis, was first constructed. The transformation system using this plasmid, in addition to the integrative transformation system, will be applicable to genetic studies of C. tropicalis.

    DOI: 10.1016/S1389-1723(99)80143-1

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  • Genetic evaluation of physiological functions of thiolase isozymes in the n-alkane-assimilating yeast Candida tropicalis 査読

    N Kanayama, M Ueda, H Atomi, A Tanaka

    JOURNAL OF BACTERIOLOGY   180 ( 3 )   690 - 698   1998年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:AMER SOC MICROBIOLOGY  

    The n-alkane-assimilating diploid yeast Candida tropicalis possesses three thiolase isozymes encoded by trio pairs of alleles: cytosolic and peroxisomal acetoacetyl-coenzyme A (CoA) thiolases, encoded by CT-T1A and CT-TIE, and peroxisomal 3-ketoacyl-CoA thiolase, encoded by CT-T3A and CT-T3B. The physiological functions of these thiolases have been examined by gene disruption, The homozygous ct-t1a Delta/t1b Delta null mutation abolished the activity of acetoacctyl-CoA thiolase and resulted in mevalonate auxotrophy. The homozygous ct-t3a Delta/t3b Delta null mutation abolished the activity of 3-ketoacyl-CoA thiolase and resulted in growth deficiency on fz-alkanes (C-10 to C-13), All thiolase activities in this yeast disappeared with the ct-t1a Delta/t1b Delta and ct-t3a Delta/t3b Delta null mutations. To further clarify the function of peroxisomal acetoacetyl-CoA thiolases, the site-directed mutation leading acetoacetyl-CoA thiolase without a putative C-terminal peroxisomal targeting signal was introduced on the CT-TIA locus in the ct-t1b Delta null mutant. The truncated acetoacetyl-CoA thiolase vies solely present in cytoplasm, and the absence of acetoacetyl-CoA thiolase in peroxisomes had no effect on growth on all carbon sources employed. Growth on butyrate was not affected by a lack of peroxisomal acetoacetyl-CoA thiolase, while a retardation of growth hy a lack of peroxisomal 3-ketoacyl-CoA thiolase was observed. A defect of both peroxisomal isozymes completely inhibited growth on butyrate. These results demonstrated that cytosolic acetoacetyl-CoA thiolase was indispensable for the mevalonate pathway and that both peroxisomal acetoacetyl-CoA thiolase and 3-ketoacyl-CoA thiolase could participate in peroxisomal beta-oxidation. In addition to its essential contribution to the beta-oxidation of longer-chain fatty acids, 3-ketoacyl-CoA thiolase contributed greatly el en to the beta-oxidation of a C-4 substrate butyrate.

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  • Expression of acetoacetyl-CoA thiolase isozyme genes of n-alkane-assimilating yeast, Candida tropicalis: Isozymes in two intracellular compartments are derived from the same genes 査読

    N Kanayama, Y Himeda, H Atomi, M Ueda, A Tanaka

    JOURNAL OF BIOCHEMISTRY   122 ( 3 )   616 - 621   1997年9月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:OXFORD UNIV PRESS  

    In the n-alkane-assimilating yeast Candida tropicalis, there are two isozymes of acetoacetyl-CoA thiolase, peroxisomal acetoacetyl-CoA thiolase (peroxisomal Thiolase I), and cytosolic acetoacetyl-CoA thiolase (cytosolic Thiolase I). We have previously isolated two genes (CT-T1A and CT-T1B) which encode Thiolase I. In order to compare the expressed products of Thiolase I isozyme-encoding genes in C. tropicalis, cytosolic Thiolase I was first purified from glucose-grown C. tropicalis in which the proliferation of peroxisomes and the expression of peroxisomal Thiolase I were repressed. Cytosolic Thiolase I was virtually identical to peroxisomal Thiolase I in molecular mass, kinetic and immunochemical properties, and primary structure at the N-terminus. Amino acid sequence analysis revealed that cytosolic Thiolase I was the mixture of products of two genes (CT-T1A and CT-T1B), as in the case of the peroxisomal enzyme. CT-T1A and CT-T1B were expressed independently in the yeast Saccharomyces cerevisiae and the recombinant proteins were purified. Recombinant Thiolase IA and IB exhibited practically identical enzymatic properties to cytosolic and peroxisomal Thiolase Is from C. tropicalis. These results revealed that cytosolic Thiolase I and peroxisomal Thiolase I were encoded not by different genes, but by the same genes (CT-T1A and CT-T1B) and are present as a mixture of products expressed by both genes, although their subcellular localizations are different.

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  • Derepression of gene expression mediated by the 5' upstream region of the isocitrate lyase gene of Candida tropicalis is controlled by two distinct regulatory pathways in Saccharomyces cerevisiae 査読

    K Umemura, H Atomi, T Kanai, S Takeshita, N Kanayama, M Ueda, A Tanaka

    EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY   243 ( 3 )   748 - 752   1997年2月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:WILEY-BLACKWELL  

    The 5' upstream region of the gene encoding isocitrate lyase of Candida tropicalis (UPR-ICL) is functional as a promoter in Saccharomyces cerevisiae, and it is regulated by carbon source; the expression of the gene is repressed when cells are grown on glucose, while it increases to a higher level in acetate-grown cells. Therefore, we have investigated regions in UPR-ICL responsible for gene expression in glucose-grown and acetate-grown cells. In glucose-grown cells, a deletion of the region between -801 and -569 (region G1) significantly decreased gene expression compared with that observed with the complete UPR-ICL. The region from -421 to -379 (region G2) also repressed gene expression in glucose-grown cells. In acetate-grown cells, two regions were found to strongly enhance gene expression, one between -728 and -569 (region A1) and the other between -370 and -356 (region A2). Whereas region A2 contained a sequence motif similar to the carbon-source-responsive element (CSRE), which mediates regulation by carbon source of S. cerevisiae ICL1, region A1 did not show similarity to any reported cis-acting elements. Deletion mutants of UPR-ICL containing only one of these regions showed that each region could independently activate gene expression to a similar level when the cells were grown on acetate. The influences of null mutations in the MIG1, SNF1 and CAT8 genes on regulation of UPR-ICL-mediated gene expression were examined. Expression of the ICL gene with full-length UPR-ICL increased about tenfold in mig1 cells grown on glucose, while little difference was observed in acetate-grown cells. The effects of snf1 and cat8 mutations were different between region-Al-mediated and region-A2-mediated gene expression in acetate-grown cells. Region-A2-mediated expression decreased 95% and 86% in snf1 and cat8 cells, respectively, while region-A1-mediated expression decreased 72% in snf1 cells and was not affected by the cat8 mutation. This finding indicates that region-A1-mediated gene expression is regulated by a pathway independent of CAT8, which is necessary for derepression of CSRE-mediated gene expression in S. cerevisiae.

    DOI: 10.1111/j.1432-1033.1997.00748.x

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  • 3-KETOACYL COA THIOLASES OF A YEAST, CANDIDA-TROPICALIS - PROPERTIES AND FUNCTIONS 査読

    A TANAKA, T KURIHARA, N KANAYAMA, H ATOMI, M UEDA

    ENZYME ENGINEERING XII   750   39 - 43   1995年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:NEW YORK ACAD SCIENCES  

    DOI: 10.1111/j.1749-6632.1995.tb19922.x

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  • COMPARISON OF MOLECULAR-STRUCTURES AND REGULATION OF BIOSYNTHESIS OF UNIQUE THIOLASE ISOZYMES LOCALIZED ONLY IN PEROXISOMES OF N-ALKANE-UTILIZABLE YEAST, CANDIDA-TROPICALIS 査読

    N KANAYAMA, M UEDA, H ATOMI, T KURIHARA, J KONDO, Y TERANISHI, A TANAKA

    JOURNAL OF FERMENTATION AND BIOENGINEERING   78 ( 4 )   273 - 278   1994年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC FERMENTATION BIOENGINEERING, JAPAN  

    Two transcribed genes encoding 3-ketoacyl-CoA thiolase [(EC 2.3.1.16) Thiolase III], one of the peroxisomal thiolase isozymes, of n-alkane-utilizable yeast, Candida tropicalis, were isolated. Restriction maps of these two genes were very similar. Each of the genes had only one open reading frame consisting of 1224 bp corresponding to 408 amino acid residues. The nucleotide sequences of another thiolase isozyme in peroxisomes of C. tropicalis, acetoacetyl-CoA thiolase (Thiolase IA and IB), have been already determined (Kurihara et al., fur. J. Biochem., 210, 999-1005, 1992). The amino acid sequences of these peroxisomal thiolase isozymes (Thiolases I and III) showed 35% homology. The regulation of biosynthesis of these thiolases in C. tropicalis was compared by RNA and Western blotting analyses. The results revealed that the biosynthesis of Thiolase III in C. tropicalis was strongly induced in a medium containing butyrate or alkanes as a carbon source and a peroxisome proliferator, while Thiolase I was constitutively expressed even in a medium with glucose or acetate, although a slight induction was observed at the levels of transcription and translation in the medium containing butyrate or alkanes. Thus, the regulations of biosyntheses of Thiolases I and III were found to be quite different, in spite of the enzymes in the final step of the peroxisomal fatty acid beta-oxidation system.

    DOI: 10.1016/0922-338X(94)90356-5

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  • MOLECULAR EVOLUTION OF YEAST THIOLASE ISOZYMES 査読

    N KANAYAMA, M UEDA, H ATOMI, T KURIHARA, A TANAKA

    JOURNAL OF FERMENTATION AND BIOENGINEERING   78 ( 4 )   279 - 282   1994年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SOC FERMENTATION BIOENGINEERING, JAPAN  

    The coexistence of two thiolase isozymes (acetoacetyl-CoA thiolase and 3-ketoacyl-CoA thiolase), essential for the complete degradation of fatty acids, only in peroxisomes of an n-alkane-utilizing yeast Candida tropicalis (Kurihara et al., J. Biochem., 106, 474-478, 1989) is unique in eukaryotic cells. As one of the methods of analysis of molecular information from these isozymes, the calculation of the evolutional distance among thiolases from various organisms suggested that yeast peroxisomal thiolase isozymes are important enzymes in examining the molecular evolution of the fatty acid metabolic pathway and the biogenesis of peroxisomes.

    DOI: 10.1016/0922-338X(94)90357-3

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  • Molecular cloning of the peroxisomal bifunctional enzyme gene from n-alkane-utilizable yeast, Candida tropicalis pK233(共著)

    Wei DZ, Kanayama N, Ueda M, Tanaka A

    The Annual Reports of ICBiotech(International Center of Cooperative Research in Biotechnology, Faculty of Engineering, Osaka University, Japan)   16   215 - 222   1993年

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(大学,研究機関等紀要)  

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  • PEROXISOMAL ACETOACETYL-COA THIOLASE OF AN N-ALKANE-UTILIZING YEAST, CANDIDA-TROPICALIS 査読

    T KURIHARA, M UEDA, N KANAYAMA, J KONDO, Y TERANISHI, A TANAKA

    EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY   210 ( 3 )   999 - 1005   1992年12月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究論文(学術雑誌)   出版者・発行元:SPRINGER VERLAG  

    Two genes encoding acetoacetyl-CoA thiolase (thiolase I; EC 2.3.1.9), whose localization in peroxisomes was first found with an n-alkane-utilizing yeast, Candida tropicalis, were isolated from the lambdaEMBL3 genomic DNA library prepared from the yeast genomic DNA. Nucleotide sequence analysis revealed that both genes contained open reading frames of 1209 bp corresponding to 403 amino acid residues with methionine at the N-terminus, which were named as thiolase IA and thiolase IB. The calculated molecular masses were 41 898 Da for thiolase IA and 41 930 Da for thiolase IB. These values were in good agreement with the subunit mass of the enzyme purified from yeast peroxisomes (41 kDa). There was an extremely high similarity between these two genes (96% of nucleotides in the coding regions and 98% of amino acids deduced). From the amino acid sequence analysis of the purified peroxisomal enzyme, it was shown that thiolase IA and thiolase IB were expressed in peroxisomes at an almost equal level. Both showed similarity to other thiolases, especially to Saccharomyces uvarum cytosolic acetoacetyl-CoA thiolase (65% amino acids of thiolase IA and 64% of thiolase IB were identical with this thiolase). Considering the evolution of thiolases, the C. tropicalis thiolases and S. uvarum cytosolic acetoacetyl-CoA thiolase are supposed to have a common origin. It was noticeable that the carboxyl-terminal regions of thiolases IA and IB contained a putative peroxisomal targeting signal, -Ala-Lys-Leu-COOH, unlike those of other thiolases reported hitherto.

    DOI: 10.1111/j.1432-1033.1992.tb17505.x

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書籍等出版物

  • バイオ実験を安全に行うために

    (株)化学同人  2018年  ( ISBN:9784759819212

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  • ラボ必携 フローサイトメトリーQ&A〜正しいデータを出すための100箇条 (実験医学別冊)

    戸村 道夫

    羊土社  2017年11月  ( ISBN:4758122350

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    総ページ数:313  

    ASIN

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  • 生物工学よもやま話ー実験の基本原理から応用までー

    有限会社 学進出版  2013年  ( ISBN:9784907773052

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  • ひらく、ひらく「バイオの世界」

    化学同人  2012年  ( ISBN:9784759815382

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  • 次世代抗体医薬開発に向けた抗体工学の最前線

    シーエムシー出版  2012年  ( ISBN:9784781306735

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  • 改訂 細胞工学

    講談社  2010年  ( ISBN:9784061398306

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  • 未来をつくるバイオ 酒造りから再生医療まで60話 社団法人 日本生物工学会編 Part 5 生体素子とバイオテクノロジー

    学進出版  2008年 

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  • 生物工学実験書

    培風館(東京)  2002年 

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MISC

  • AIDによる免疫グロブリンの体細胞高頻度突然変異誘導と関連分子

    臨床免疫・アレルギー科   61 ( 5 )   467 - 471   2014年

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  • 免疫グロブリンの体細胞高頻度突然変異とserine/arginine protein splicing factor (SRSF)

    臨床免疫・アレルギー科   61 ( 5 )   489 - 495   2014年

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  • 胚中心におけるB細胞のnegative selectionと濾胞樹状細胞

    臨床免疫・アレルギー科   58 ( 3 )   259 - 265   2012年

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  • 抗体遺伝子への突然変異能を有するニワトリB細胞株の機能拡張によるin vitroモノクローナル抗体作成・改良システム

    金山 直樹, 大森 齊

    細胞工学   31 ( 10 )   1159 - 1165   2012年

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  • フローサイトメトリー〜「前にならえ」並べて順に数えます〜

    金山直樹

    日本生物工学会誌   90 ( 11 )   785 - 789   2012年

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  • DT40細胞株を用いたin vitro抗体作製システムにおける,抗原レセプターの刺激に依存した生存による抗原特異的抗体産生細胞の選択法の開発

    渡邊康二, 藤堂景史, 福岡純司, 曲正樹, 大森齊, 金山直樹

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)   35th   2012年

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  • 4Ep15 ニワトリB細胞株DT40-SWを用いた異種抗体改良システムの構築(抗体工学/有機化学,高分子化学,一般講演)

    佐井 燕, 小島 聡史, 藤井 忍, 北村 幸一, 鴨下 佳代子, 池田 美香, 曲 正樹, 大森 齊, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集   64   212 - 212   2012年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本生物工学会  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2013125691

  • 4Ep14 変異能力を有する培養B細胞株DT40を用いた新規なタンパク質ディスプレーシステムの開発(抗体工学/有機化学,高分子化学,一般講演)

    日笠 卓哉, 松田 修一, 植月 英智, 曲 正樹, 大森 斎, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集   64   212 - 212   2012年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本生物工学会  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2013125690

  • 4Ep16 ヒト型抗体発現ニワトリB細胞株DT40を用いた抗原特異的抗体の作製(抗体工学/有機化学,高分子化学,一般講演)

    川上 夏奈江, 井上 和恵, 岡山 展久, 金広 優一, 池田 美香, 曲 正樹, 大森 斉, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集   64   212 - 212   2012年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本生物工学会  

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  • B細胞免疫記憶 AIDに依存したIgV変異には、SRタンパク質SRSF1のスプライスアイソフォームが必要である(AID-dependent IgV hypermutation requires a splice isoform of the SR protein SRSF1)

    金山 直樹, 金広 優一, 藤堂 景史, 根岸 美咲, 福岡 純司, 曲 正樹, Li Xialu, Manley James L, 大森 斉

    日本免疫学会総会・学術集会記録   40   172 - 172   2011年11月

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    記述言語:英語   出版者・発行元:(NPO)日本免疫学会  

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  • AIDに依存した体細胞突然変異には、SRタンパク質SRSF1のスプライスアイソフォームが必要である

    金山 直樹, 金広 優一, 藤堂 景史, 根岸 美咲, 福岡 純司, 曲 正樹, Li Xialu, Manley James L, 大森 斉

    日本生化学会大会プログラム・講演要旨集   84回   3T15a - 15   2011年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • 胚中心B細胞の分化と濾胞樹状細胞

    大森 斉, 曲 正樹, 金山直樹

    臨床免疫・アレルギー科   56 ( 2 )   116 - 122   2011年

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  • 変異能力を有するニワトリB細胞株DT40-SWを用いたマウスモノクローナル抗体の親和性成熟

    鴨下 佳代子, 小島 聡史, 藤井 忍, 北村 幸一, 井上 和恵, 岡山 展久, 松田 修一, 小嶋 宏侑, 池田 美香, 金広 優一, 藤堂 景史, 曲 正樹, 大森 齊, 金山 直樹

    日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集   83回・33回   2T6 - 10   2010年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • 抗体遺伝子への体細胞突然変異におけるsplicing factor ASF/SF2の寄与

    金広 優一, 藤堂 景史, 根岸 美咲, 福岡 純司, 曲 正樹, 大森 齊, 金山 直樹

    日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集   83回・33回   2P - 0478   2010年12月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • Efficient in vitro antibody generation system using an engineered chicken B cell line, DT40-SW

    Hitoshi Ohmori, Masaki Magari, Naoki Kanayama, Shuichi Matsuda, Yuichi Kanehiro

    JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY   150   S440 - S441   2010年11月

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    記述言語:英語   掲載種別:研究発表ペーパー・要旨(国際会議)   出版者・発行元:ELSEVIER SCIENCE BV  

    DOI: 10.1016/j.jbiotec.2010.09.628

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  • 変異能力を有するニワトリB細胞株DT40-SWを用いたマウスモノクローナル抗体の親和性成熟

    金山 直樹, 小島 聡史, 藤井 忍, 北村 幸一, 井上 知恵, 岡山 展久, 松田 修一, 鴨下 佳代子, 藤堂 景史, 池田 美香, 曲 正樹, 大森 齊

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成22年度   81 - 81   2010年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • 変異能力を有するニワトリB細胞株を用いた抗体の親和性成熟:変異様式の変換による親和性成熟の効率化

    梶田真道, 曲正樹, 池田美香, 藤堂景史, 金山直樹, 大森斉

    日本分子生物学会年会講演要旨集   32nd ( Vol.1 )   2009年

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  • 変異能力を有するニワトリB細胞株を用いた抗体の親和性成熟:外来の抗体可変部遺伝子のDT40-SWにおける発現・改良系の構築

    小島聡史, 藤井忍, 北村幸一, 井上知恵, 岡山展久, 松田修一, 藤堂景史, 曲正樹, 金山直樹, 大森斉

    日本分子生物学会年会講演要旨集   32nd ( Vol.1 )   2009年

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  • 変異導入能力を有する培養B細胞株を用いたin vitro抗体作製システムの高機能化

    金山 直樹, 曲 正樹, 梶田 真道, 金広 優一, 藤堂 景史, 大森 斉

    日本生化学会大会・日本分子生物学会年会合同大会講演要旨集   81回・31回   1T9 - 7   2008年11月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • ニワトリB細胞株を用いたin vitro抗体作製システムの高機能化 変異様式の転換の高性能抗体作製への応用

    梶田 真道, 藤堂 景史, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成20年度   109 - 109   2008年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • ニワトリB細胞株DT40-SWを用いたin vitro抗体作製システムの高機能化 抗体遺伝子への変異導入効率の増強

    金広 優一, 曲 正樹, 藤堂 景史, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成20年度   109 - 109   2008年7月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • 抗体医薬が切り拓く先端医療 培養B細胞株を用いるin vitro抗体作製システムによる有用抗体の創製

    金山 直樹, 藤堂 景史, 曲 正樹, 大森 齊

    日本薬学会年会要旨集   128年会 ( 1 )   134 - 134   2008年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本薬学会  

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  • 効率的in vitro抗体作製システムの開発

    大森 斉, 金山直樹

    BIO Clinica   23 ( 8 )   82 - 87   2008年

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  • ニワトリB細胞株DT40-SWを用いるin vitro抗体作製システムの開発 変異導入の促進による迅速な抗体ライブラリーの構築

    金広 優一, 曲 正樹, 藤堂 景史, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成19年度   148 - 148   2007年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • ニワトリB細胞株DT40-SWを用いるin vitro抗体作製システムの開発 Pax5発現抑制による抗体産生の増強

    曲 正樹, 綾 高宏, 藤堂 景史, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成19年度   149 - 149   2007年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • ニワトリB細胞株DT40-SWを用いるin vitro抗体作製システムの開発 抗原特異的クローンのセルソーターによる効率的単離

    岡澤 貴裕, 藤堂 景史, 梶田 真道, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成19年度   149 - 149   2007年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • 変異機能のON/OFF制御可能なB細胞株を用いた抗体および変異タンパク質の作製システム

    大森 斉, 藤堂景史, 金山直樹

    実験医学   124 (9), pp. 1331-1335   2006年

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  • 1K16-1 培養B細胞株を用いた新規in vitro抗体作製システムによるモノクローナル抗体の取得(プロセス工学/糖鎖工学/免疫工学,一般講演)

    藤堂 景史, 三宅 健司, 藤田 梨紗子, 岡澤 貴裕, 池田 美香, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   18   197 - 197   2006年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本生物工学会  

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  • 1K16-2 点突然変異と遺伝子変換の制御によるニワトリB細胞株DT40からの高性能抗体ライブラリの構築(プロセス工学/糖鎖工学/免疫工学,一般講演)

    梶田 真道, 藤堂 景史, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   18   197 - 197   2006年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本生物工学会  

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  • 抗体遺伝子変換機構を利用した非抗体タンパクのDNAシャッフリングによる機能改変

    藤堂 景史, 高橋 佐都子, 片岡 大輔, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本免疫学会総会・学術集会記録   35   80 - 80   2005年11月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(NPO)日本免疫学会  

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  • 培養B細胞株の変異機能を利用する新規なin vitro抗体作製システム

    三宅 健司, 藤堂 景史, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成17年度   118 - 118   2005年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • 抗体の多様化メカニズムの不思議

    金山直樹

    日本生物工学会誌   83 (1), 33   2005年

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  • 高頻度変異機能のON/OFF制御可能なB細胞株を用いるin vitro抗体作製システム

    金山直樹, 藤堂景史, 三宅健司, 曲正樹, 大森斉

    日本分子生物学会年会講演要旨集   28th   2005年

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  • B細胞の遺伝子変換機構を利用する非抗体タンパクの機能改変

    藤堂景史, 高橋佐都子, 片岡大輔, 曲正樹, 金山直樹, 大森斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   2005   2005年

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  • B細胞株の遺伝子改変能を利用したタンパク分子改変システムの構築

    藤堂 景史, 高橋 佐都子, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本免疫学会総会・学術集会記録   34   263 - 263   2004年11月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(NPO)日本免疫学会  

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  • B細胞レパトアの限定されたマウスにおけるB細胞選択と親和性成熟の解析

    金山 直樹, 木本 崇文, 藤堂 景史, 曲 正樹, 大森 齊

    生化学   76 ( 3 )   306 - 306   2004年3月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • ニワトリB細胞株を用いたタンパク分子改変系の構築:外来遺伝子の遺伝子変換

    高橋佐都子, 藤堂景史, 曲正樹, 金山直樹, 大森斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   2004   2004年

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  • ニワトリB細胞株を用いたタンパク分子改変系の構築:変異導入機能のON/OFF制御

    藤堂景史, 曲正樹, 金山直樹, 大森斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   2004   2004年

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  • B細胞レセプターを介するシグナルとB細胞応答

    曲正樹, 金山直樹, 大森斉

    臨床免疫   40, 454-457   2003年

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  • 平成13年度両備てい園記念財団研究助成金による研究報告 Qmasimonoclonal マウスにおける抗体親和性成熟

    金山直樹

    生物学に関する試験研究論叢   18, 57-67   2003年

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  • 辺縁帯B細胞の特性

    金山直樹, 大森斉

    臨床免疫   40, 450-453   2003年

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  • 2C09-1 ニワトリ B 細胞を用いる外来遺伝子の改変と発現

    藤堂 景史, 高橋 佐都子, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   15   87 - 87   2003年

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:日本生物工学会  

    CiNii Article

    CiNii Books

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  • B細胞多様性の限定されたマウスにおけるクローン選択と親和性成熟の解析

    木本 崇文, 藤堂 景史, 疋田 正喜, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本免疫学会総会・学術集会記録   32   271 - 271   2002年10月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(NPO)日本免疫学会  

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  • B細胞多様性の限定されたマウスにおける抗体の親和性成熟機構の解析

    藤堂 景史, 木本 崇文, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集   平成14年度   206 - 206   2002年9月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生物工学会  

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  • B細胞レパトアの限定されたマウスを用いるB細胞選択と親和性成熟の解析

    木本 崇文, 松浦 正明, 藤堂 景史, 曲 正樹, 疋田 正喜, 金山 直樹, 大森 齊

    生化学   74 ( 8 )   949 - 949   2002年8月

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    記述言語:日本語   出版者・発行元:(公社)日本生化学会  

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  • 末梢でのV(D)J遺伝子再構成の親和性成熟への寄与

    疋田正喜, 金山直樹, 大森 斉

    臨床免疫   36, 54-59   2001年

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  • 末梢リンパ組織における抗体遺伝子の再構成。 抗体遺伝子の構造はどこまで柔軟か?

    大森 斉, 疋田正喜, 金山直樹

    細胞工学   19, 482-487   2000年

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  • 胚中心B細胞におけるレセプターeditingとその意義。

    大森 斉, 疋田正喜, 金山直樹

    Molecular Midicne 「免疫1999-2000」   36, 20-28   1999年

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講演・口頭発表等

  • 濾胞樹状細胞の発現するSLAM-family memberによる抗体応答の制御

    西岡 美玖, 西岡 美穂, 小川 紗也香, 金山 直樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 曲 正樹

    第44回日本分子生物学会年会  2021年12月2日 

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    開催年月日: 2021年12月1日 - 2021年12月3日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • シグナル伝達因子LynによるAID発現制御機構の解明

    秋山 美咲, 大森 晴斗, 梶浦 雄也, 石橋 朋之, 久原 亜弓, 曲 正樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 金山 直樹

    第44回日本分子生物学会年会  2021年12月2日 

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    開催年月日: 2021年12月1日 - 2021年12月3日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 濾胞樹状細胞依存的に発生する単球系細胞が発現するB細胞活性化因子の同定

    羽里 知美, 高田 美帆, 波多野 直哉, 金山 直樹, 徳光 浩, 曲 正樹

    第44回日本分子生物学会年会  2021年12月2日 

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    開催年月日: 2021年12月1日 - 2021年12月3日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • B細胞活性化能力を有する単球系細胞の分化におけるIL-34作用機構の解明

    岡本 千怜, 小川 紗也香, 松岡 由希子, 金山 直樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 曲 正樹

    第44回日本分子生物学会年会  2021年12月2日 

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    開催年月日: 2021年12月1日 - 2021年12月3日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • B細胞抗原レセプターシグナル強度に依存して誘導される分子の探索

    安福 希, 曲 正樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 金山 直樹

    第44回日本分子生物学会年会  2021年12月1日 

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    開催年月日: 2021年12月1日 - 2021年12月3日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 濾胞樹状細胞の発現する SLAM-family member による胚中心反応の制御

    西岡美玖, 西岡美穂, 小川紗也 香, 波多野直哉, 金山直樹, 徳光 浩, 曲正樹

    第 43 回日本分子生物学会年会 

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    開催年月日: 2020年12月2日 - 2020年12月4日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 191 濾胞樹状細胞依存的に分化する B 細胞活 性化能力を有した単球系細胞の分化機構 の解析

    曲 正樹, 小川紗也香, 岡本千怜, 西岡美玖, 金山直樹, 波多野直 哉, 徳光浩

    第43 回日本分子生物学会年会 

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    開催年月日: 2020年12月2日 - 2020年12月4日

    記述言語:日本語   会議種別:ポスター発表  

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  • 分子プローブとしてのCa2+/Calmodulin-dependent pro- tein kinase kinase 新規阻害剤と不活性 類縁体の開発

    大塚里美, 尾関 唯, 藤原萌乃, 宮川 知之, 金山直樹, 曲 正樹, 石川 彰彦, 徳光浩

    第 61 回日本生化学会中国・四国大会  2020年5月23日 

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    開催年月日: 2020年5月23日 - 2020年5月24日

    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 新規S100A6標的分子(HMG20A)の同定と相互作用解析

    山本 真穂, 近藤 里奈, 傳田 美和子, 土居 青太, 金山 直樹, 曲 正樹, 森下 了, 徳光 浩

    日本生化学会大会プログラム・講演要旨集  2019年9月  (公社)日本生化学会

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    開催年月日: 2019年9月

    記述言語:日本語  

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  • scFv型抗体を発現するニワトリB細胞株DT40の樹立と利用

    岡 知里, 野田 凌太郎, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2019年8月  (公社)日本生物工学会

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    開催年月日: 2019年8月

    記述言語:日本語  

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  • ニワトリB細胞株DT40におけるscFv型抗体の発現効率の改善

    野田 凌太郎, 岡 知里, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2019年8月  (公社)日本生物工学会

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    開催年月日: 2019年8月

    記述言語:日本語  

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  • CaMKKβのリン酸化/脱リン酸化による動的制御機構の解明

    高畠翔太, 福本侑世, 金山直樹, 曲正樹, 波多野直哉, 徳光浩

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2019年 

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    開催年月日: 2019年

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  • 筋肉特異的Calmodulin結合分子,Striated Muscle Activator of Rho Signaling(STARS)の分子間相互作用解析

    赤木魁, 田中啓之, 金山直樹, 曲正樹, 波多野直哉, 徳光浩

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2019年 

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    開催年月日: 2019年

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  • STO-609をリード化合物とした新規CaMKK阻害薬の創製

    大塚里美, 尾関唯, 藤井つかさ, 金山直樹, 曲正樹, 石川彰彦, 徳光浩

    日本生化学会大会(Web)  2019年 

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    開催年月日: 2019年

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  • 濾胞樹状細胞の活性化に伴い高発現する分子の探索とその機能解析

    西岡美玖, 西岡美穂, 小川紗也香, 波多野直哉, 金山直樹, 徳光浩, 曲正樹

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2019年 

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    開催年月日: 2019年

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  • 濾胞樹状細胞表面に発現するIL-34がB細胞活性化能力を有する単球系細胞の分化に関与する

    曲正樹, 小川紗也香, 松岡由希子, 高田美帆, 金山直樹, 波多野直哉, 徳光浩

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2019年 

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    開催年月日: 2019年

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  • BCRシグナル伝達を介したAID発現制御の解析

    石橋朋之, 梶浦雄也, 久原亜弓, 大柳翔, 秋山美咲, 曲正樹, 徳光浩, 金山直樹

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2019年 

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    開催年月日: 2019年

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  • CaMKKβシグナル伝達のAMPKおよびPKAによるリン酸化制御機構の解明

    大塚 里美, 高畠 翔太, 金山 直樹, 曲 正樹, 徳光 浩

    日本生化学会大会プログラム・講演要旨集  2018年9月  (公社)日本生化学会

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    開催年月日: 2018年9月

    記述言語:日本語  

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  • スプライシング因子の過剰発現及び標的遺伝子配列の操作によるニワトリB細胞株における遺伝子変異の増強

    金山 直樹, 太田 愛美, 西山 由美子, 岡 知里, 曲 正樹, 徳光 浩

    日本生物工学会大会講演要旨集  2018年8月  (公社)日本生物工学会

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    開催年月日: 2018年8月

    記述言語:日本語  

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  • GRP78により発現制御される濾胞樹状細胞表面のIL-34が単球系細胞の分化に関与する

    小川紗也香, 松岡由希子, 高田美帆, 松井一恵, 山根文寛, 安原詩織, 金山直樹, 波多野直哉, 徳光浩, 曲正樹

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2018年 

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    開催年月日: 2018年

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  • AID発現とSHM誘導におけるBCRシグナルの役割

    梶浦 雄也, 金廣 優一, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹

    生命科学系学会合同年次大会  2017年12月  生命科学系学会合同年次大会運営事務局

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    開催年月日: 2017年12月

    記述言語:日本語  

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  • 濾胞樹状細胞の発現するCSF-1の単球系細胞分化への関与の解析

    安原 詩織, 松岡 由希子, 小川 紗也香, 金山 直樹, 徳光 浩, 曲 正樹

    生命科学系学会合同年次大会  2017年12月  生命科学系学会合同年次大会運営事務局

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    開催年月日: 2017年12月

    記述言語:日本語  

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  • 抗体遺伝子変異の転写関連過程におけるSRSF1-3の役割の解析

    金山 直樹, 川口 祐加, 横山 和輝, 石橋 朋之, 曲 正樹, 徳光 浩

    生命科学系学会合同年次大会  2017年12月  生命科学系学会合同年次大会運営事務局

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    開催年月日: 2017年12月

    記述言語:日本語  

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  • スプライシング因子の過剰発現及び標的遺伝子配列の操作によるニワトリB細胞株における遺伝子変異の増強

    太田 愛美, 西山 由美子, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山 直樹

    生命科学系学会合同年次大会  2017年12月  生命科学系学会合同年次大会運営事務局

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    開催年月日: 2017年12月

    記述言語:日本語  

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  • 抗体遺伝子変異能力を操作できるニワトリB細胞を用いた動物細胞ディスプレイ

    金山 直樹, 太田 愛美, 中谷 元紀, 中谷 耕治, 植月 英智, 西山 由美子, 仲尾 祐輝, 曲 正樹, 徳光 浩

    日本生物工学会大会講演要旨集  2017年8月  (公社)日本生物工学会

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    開催年月日: 2017年8月

    記述言語:日本語  

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  • インターラクトーム解析法を用いたヒトS100A6標的分子の探索

    坂根恭平, 西口みゆ, 古谷雄穂, 傳田美和子, 山口文徳, 曲正樹, 金山直樹, 森下了, 徳光浩

    日本生化学会大会(Web)  2015年12月  (公社)日本生化学会

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    開催年月日: 2015年12月

    記述言語:日本語  

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  • Ca<sup>2+</sup>/Calmodulin結合型転写因子の網羅的同定

    太尾田泰成, 大西和貴, 古谷雄穂, 傳田美和子, 金山直樹, 曲正樹, 森下了, 徳光浩

    日本生化学会大会(Web)  2015年 

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    開催年月日: 2015年

    記述言語:日本語  

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  • 3P-032 変異能力を備えたB細胞株を用いた抗体の機能改変(抗体工学,一般講演)

    金山 直樹, 渡邊 康二, 古賀 舞, 川上 夏奈江, 植月 英智, 徳光 浩, 曲 正樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集  2014年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2014年

    記述言語:日本語  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2016046032

  • 3P-003 変異能力を有するB細胞株DT40-SWを用いたタンパク質ディスプレーシステムにおけるタンパク質進化

    渡邊 康二, 日笠 卓哉, 植月 英知, 徳光 浩, 曲 正樹, 大森 斉, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2013年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2013年

    記述言語:日本語  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2014247582

  • 3P-002 B細胞抗原レセプター依存性アポトーシスの制御によるニワトリB細胞株DT40-SWを用いた高親和性抗体の作製

    古賀 舞, 池田 美香, 小嶋 宏侑, 川上 夏奈江, 渡邊 康二, 徳光 浩, 曲 正樹, 大森 斉, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2013年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2013年

    記述言語:日本語  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2014247581

  • 4Ep16 ヒト型抗体発現ニワトリB細胞株DT40を用いた抗原特異的抗体の作製(抗体工学/有機化学,高分子化学,一般講演)

    川上 夏奈江, 井上 和恵, 岡山 展久, 金広 優一, 池田 美香, 曲 正樹, 大森 斉, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2012年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2012年

    記述言語:日本語  

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  • DT40細胞株を用いたin vitro抗体作製システムにおける,抗原レセプターの刺激に依存した生存による抗原特異的抗体産生細胞の選択法の開発

    渡邊康二, 藤堂景史, 福岡純司, 曲正樹, 大森齊, 金山直樹

    日本分子生物学会年会プログラム・要旨集(Web)  2012年 

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    開催年月日: 2012年

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  • 4Ep14 変異能力を有する培養B細胞株DT40を用いた新規なタンパク質ディスプレーシステムの開発(抗体工学/有機化学,高分子化学,一般講演)

    日笠 卓哉, 松田 修一, 植月 英智, 曲 正樹, 大森 斎, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2012年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2012年

    記述言語:日本語  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2013125690

  • 4Ep15 ニワトリB細胞株DT40-SWを用いた異種抗体改良システムの構築(抗体工学/有機化学,高分子化学,一般講演)

    佐井 燕, 小島 聡史, 藤井 忍, 北村 幸一, 鴨下 佳代子, 池田 美香, 曲 正樹, 大森 齊, 金山 直樹

    日本生物工学会大会講演要旨集  2012年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2012年

    記述言語:日本語  

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    その他リンク: http://search.jamas.or.jp/link/ui/2013125691

  • B細胞免疫記憶 AIDに依存したIgV変異には、SRタンパク質SRSF1のスプライスアイソフォームが必要である(AID-dependent IgV hypermutation requires a splice isoform of the SR protein SRSF1)

    金山 直樹, 金広 優一, 藤堂 景史, 根岸 美咲, 福岡 純司, 曲 正樹, Li Xialu, Manley James L, 大森 斉

    日本免疫学会総会・学術集会記録  2011年11月  (NPO)日本免疫学会

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    開催年月日: 2011年11月

    記述言語:英語  

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  • B細胞免疫反応と免疫記憶 超変異ニワトリB細胞株を用いたin vitro抗原生産システム(In vitro antibody generation system using a hypermutating chicken B cell line)

    Kanayama Naoki, Todo Kagefumi, Okazawa Takahiro, Ikeda Mika, Fujita Risako, Magari Masaki, Ohmori Hitoshi

    日本免疫学会総会・学術集会記録  2006年11月  (NPO)日本免疫学会

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    開催年月日: 2006年11月

    記述言語:英語  

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  • 2C09-1 ニワトリ B 細胞を用いる外来遺伝子の改変と発現

    藤堂 景史, 高橋 佐都子, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集  2003年  日本生物工学会

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    開催年月日: 2003年

    記述言語:日本語  

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  • B細胞多様性の限定されたマウスにおける抗体の親和性成熟機構の解析

    藤堂 景史, 木本 崇文, 曲 正樹, 金山 直樹, 大森 斉

    日本生物工学会大会講演要旨集  2002年9月  (公社)日本生物工学会

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    開催年月日: 2002年9月

    記述言語:日本語  

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  • 胚中心B細胞におけるRAGと並行するλ5,VpreBの再発現とその調節

    金山直樹, 疋田正喜, 烏山一, 大森斉

    日本免疫学会総会・学術集会記録  1999年 

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    開催年月日: 1999年

    記述言語:日本語  

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  • Affinity Maturation of Antibodies Using Hypermutating B Cell Line 招待

    Naoki Kanayama

    International Symposium of Innovative R&D on Health Systems: Universiti Malaysia Pahang and Okayama University  2021年9月28日 

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    記述言語:英語   会議種別:口頭発表(招待・特別)  

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  • 転写および翻訳段階におけるAID発現調節機構の解析

    大森 晴斗, 秋山 美咲, 梶浦 雄也, 石橋 朋之, 久原 亜弓, 大柳 昇, 曲 正樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 金山 直樹

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会 2021年9月10日  2021年9月11日 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 新規 CaMKK 阻害剤結合担体を用いた酵素・阻害剤相互作用解析

    大塚 里美, 波多野 直哉, 奥村 太晟, 澤 直樹, 金山 直樹, 曲 正樹, 石川 彰彦, 徳光 浩

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月11日 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1の B 細胞における発現制御機構の解明

    伊藤 雄大, 野田 凌太郎, 長門 直希, 曲 正樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 金山 直樹

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月11日 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 抗体遺伝子高頻度突然変異におけるSRSF1-3の機能部位の特定

    在間 郁冶, 石橋 朋之, 成木 弘明, 川口 祐加, 曲 正樹, 波多野 直哉, 徳光 浩, 金山 直樹

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月11日 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase kinase (CaMKK)の多量体形成

    福本 侑世, 原田 裕平, 波多野 直哉, 曲 正樹, 金山 直樹, 徳光 浩

    第62回 日本生化学会 中国・四国支部例会  2021年9月10日 

     詳細を見る

    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1 のB 細胞における発現制御機構の解明

    野田凌太郎, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山直樹

    第 39 回 岡山免疫懇話会  2021年3月3日 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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  • 抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1のB細胞における発現制御機構の解明

    野田凌太郎, 曲 正樹, 徳光 浩, 金山直樹

    日本生物工学会西日本支部大会2020  2020年11月14日 

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    記述言語:日本語   会議種別:口頭発表(一般)  

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産業財産権

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受賞

  • 内山勇三科学技術賞

    2013年   岡山工学振興会  

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    受賞国:日本国

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  • 岡山工学振興会科学技術賞

    2009年   岡山工学振興会  

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  • 第44回生物工学奨励賞(斉藤賞)

    2008年   日本生物工学会  

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    受賞国:日本国

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  • 岡山工学振興会科学技術賞

    2004年   岡山工学振興会  

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    受賞国:日本国

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共同研究・競争的資金等の研究

  • 抗原レセプターの抗原親和性に依存したシグナル伝達調節の解明と抗体作製技術への応用

    研究課題/領域番号:20K05231  2020年04月 - 2024年03月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(C)  基盤研究(C)

    金山 直樹

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    配分額:4420000円 ( 直接経費:3400000円 、 間接経費:1020000円 )

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  • RNAスプライシング因子の新規機能による抗体遺伝子高頻度突然変異の制御

    研究課題/領域番号:16K14783  2016年04月 - 2018年03月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    金山 直樹

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    配分額:3770000円 ( 直接経費:2900000円 、 間接経費:870000円 )

    抗体の抗原に対する高親和性は、抗体遺伝子可変部上に起こる体細胞高頻度突然変異によって向上する。 AIDがこの変異導入に必須であることは示されているが、変異導入機構の詳細は不明な点が多い。本研究では、抗体遺伝子への変異導入の必須因子として見いだしたRNAスプライシング因子SRSF1のアイソフォーム(SRSF1-3)の機能を、突然変異能を有するB細胞株を用いて解析した。その結果、SRSF1-3はAIDと複合体を形成して核内にAIDを蓄積させ、AIDのC末領域を介する機構によって抗体遺伝子変異を促進していることが示唆された。

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  • スプライシング因子の新規機能を利用した動物細胞ディスプレー技術の高度化

    研究課題/領域番号:15H04196  2015年04月 - 2019年03月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    金山 直樹, 徳光 浩, 曲 正樹

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    配分額:16640000円 ( 直接経費:12800000円 、 間接経費:3840000円 )

    申請者は、抗体遺伝子の変異能力を有するニワトリB細胞株DT40を利用して動物細胞ディスプレー技術を構築した。本研究では、抗原結合による生存シグナルの惹起と抗体遺伝子変異の誘導におけるSRSF1の機能の一端を明らかにし、スプライシング因子の発現操作により、外来からDT40細胞に導入した抗体遺伝子、非抗体遺伝子への変異導入効率を向上させるのに有効であることを見いだした。一方、変異導入効率に有効な導入遺伝子の最適化法も見いだした。

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  • RNAスプライシング因子に依存した抗体遺伝子高頻度突然変異の新規な制御機構の解明

    研究課題/領域番号:26650126  2014年04月 - 2016年03月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    金山 直樹

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    配分額:4030000円 ( 直接経費:3100000円 、 間接経費:930000円 )

    本研究では、抗体遺伝子への高頻度突然変異へのスプライシング因子SRSF1-3の寄与を分析するための実験系を構築し、その分子機構を解析した。アイソフォームであるSRSF1とSRSF1-3の違いがC末領域だけにもかかわらず、SRSF1-3のSHMにおける機能発現にC末領域が必ずしも必要でないことが明らかになった。さらに、SRSF1-3がAIDの核外排出を制御することがSHMにおける役割の一つであることが明らかになった。

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  • 変異能力を有した培養B細胞株の機能拡張と抗体工学的活用

    研究課題/領域番号:24360343  2012年04月 - 2015年03月

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    金山 直樹, 曲 正樹

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    配分額:12480000円 ( 直接経費:9600000円 、 間接経費:2880000円 )

    抗体は次世代の分子標的医薬として注目されており、一本鎖抗体などの改変型抗体の利用も進みつつある。我々は、これまでに変異能力を有するニワトリB細胞株DT40を利用してin vitro抗体作製システムを構築した。本研究では、他の抗体作製技術で取得された任意のモノクローナル抗体の可変部や一本鎖抗体を、ヒトIgG1抗体定常部とのキメラ抗体としてDT40細胞表面に発現させることができ、かつ、DT40の変異能力によって親和性成熟できる革新的な動物細胞ディスプレーシステムを構築した。本研究の成果は、医薬候補となりうる活性を有した抗体を創出するための技術として有用であると考えられる。

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  • 抗体遺伝子への選択的変異導入におけるASF/SF2の新規機能の解明

    研究課題/領域番号:23657092  2011年 - 2012年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 挑戦的萌芽研究  挑戦的萌芽研究

    金山 直樹

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    配分額:3900000円 ( 直接経費:3000000円 、 間接経費:900000円 )

    抗原に対する抗体の親和性は、抗体遺伝子に起こる体細胞高頻度突然変異により向上する。本研究では、突然変異能を有するニワトリB細胞株DT40を用いて、選択的スプライシング因子ASF/SF2のアイソフォーム(ASF3)が、抗体遺伝子への変異導入に必須であることを見いだした。また、ASF3が抗体遺伝子の転写後プロセシングを制御することによって、変異導入装置の活性化と抗体遺伝子への標的化において重要な役割を担っていることが示唆された。

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  • ニワトリB細胞株を利用する抗体の分子進化システムの構築と応用

    研究課題/領域番号:15760589  2003年 - 2004年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 若手研究(B)  若手研究(B)

    金山 直樹

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    配分額:3500000円 ( 直接経費:3500000円 )

    本研究は、DT40細胞の抗体遺伝子改変能力を利用して、抗体の分子進化システムを構築することを目的としている。昨年度、DT40細胞株において抗体遺伝子への突然変異と遺伝子変換の導入を厳密かつ任意に制御するために、突然変異と遺伝子変換に必須の因子であるAID遺伝子の発現をCre/loxPシステムを用いた遺伝子組み換えによって制御できる細胞株の育種を達成した。この細胞は、導入したCre-ERにより、4-hydroxytamoxyfen(4-OHT)添加時にloxPで挟まれたAIDの発現をON/OFFする。AIDの発現はGFPの発現でモニターし、AID OFFの時はピューロマイシン耐性として選択できる。
    本年度、この細胞の変異能力とスイッチ能力について評価した。4-OHTで48時間処理後、48時間追加培養したところ、OFF細胞から平均20%のGFP陽性細胞が出現した。このGFP陽性をセルソーターによって一細胞ずつ分離してAID ON細胞として培養した。2ヶ月間の継続培養後、ほぼすべてがGFP陽性であり、AIDの発現が安定して維持されていることが明らかになった。また、抗体軽鎖遺伝子上に蓄積された変異を解析したところ、解析した24クローン中13クローンで変異が認められ、DT40が本来有している能力に相当するあるいはそれ以上の変異能力を有していた。さらに、ON細胞を4-OHT処理したところ、平均50%のGFP陰性細胞が出現し、ピューロマイシン添加によりOFF細胞のみに純化できた。このOFF細胞から、再度の4-OHT処理でON細胞が出現し、ON細胞の単離、培養、OFF細胞へのスイッチが繰り返し可能であった。すなわち、この細胞を用いて、有用な変異体を取得後、AID OFFにより変異を固定し、再度ONにして抗体遺伝子に二次的変異を導入して改良することが可能になった。

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  • 免疫システムにおける抗体の特異性改変能力の解析とその応用

    研究課題/領域番号:12450334  2000年 - 2002年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 基盤研究(B)  基盤研究(B)

    大森 斉, 金山 直樹

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    配分額:12700000円 ( 直接経費:12700000円 )

    抗体の抗原に対する親和性は免疫後、時間とともに増大することが知られており、親和性成熟と呼ばれている。抗体の親和性成熟は、胚中心内で起こる高頻度の体細胞変異によるB細胞の多様化と、高親和性クローンの正の選択により起こるとされているが、その詳細には不明な点が多い。一方、我々は免疫したマウスのリンパ節B細胞においてRAG-1,RAG-2の発現が上昇し、末梢でV(D)J再構成(receptor revision)が起こることを見出し、その生理的意義を追求してきた。本研究において、B細胞レパトアの限定されたNP特異的VH遺伝子ノックインマウス(QBF1)を用いてreceptor revisionが抗体の親和性成熟に寄与しているか否か、について検討した。NPよりも低親和性のハプテンであるpNPで免疫したところ、高親和性抗pNPIgGが誘導され、その大部分はλ鎖を有していた。このλ鎖陽性抗体はリンパ節内で起こった新たなλ鎖の再構成に依存して生成したことが以下の結果より強く示唆される。1)λ鎖陽性B細胞を除去したQBF1脾臓細胞をRAG-1(-/-)マウスに移入した系で、pNP免疫後、脾臓B細胞でRAG発現が上昇し、λ鎖組換えの中間体であるJλ1-RSS breakが検出される。2)RAG発現を抑制すると、λ鎖陽性抗体の産生が減少し、抗pNPIgGの親和性が低下する。これらの結果は、末梢で免疫後にL鎖のreceptor rivisionが起こり、高親和性λ鎖陽性クローンの生成に寄与し得ることを示している。

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  • トランスジェニックマウスの成熟B細胞を用いた代替軽鎖の機能解析系の構築と応用

    研究課題/領域番号:12750704  2000年 - 2001年

    日本学術振興会  科学研究費助成事業 奨励研究(A)  奨励研究(A)

    金山 直樹

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    配分額:2200000円 ( 直接経費:2200000円 )

    本年度は、平成12年度に確立したin vitro代替軽鎖発現系を用いて、トランスジェニックマウスのB細胞での代替軽鎖の発現について検討し、また、発現細胞の由来について野生型マウスを用いて検討して、以下のような成果が得られた。
    1.B細胞レパトアが限定されたトランスジェニックマウスの脾臓B細胞を単離し、anti-CD40抗体およびIL-7で刺激したところ、λ5およびRAG2の発現がRT-PCR荷よって確認された。したがって、in vitroでの代替軽鎖はRAG2の発現は、マウスの系統やB細胞レパトアの大きさに関係なく起こる現象であり、トランスジェニックマウスを用いたin vitroの解析系は代替軽鎖およびRAGの機能解析に適していることが示された。
    2.脾臓細胞中において代替軽鎖を発現する細胞集団を同定するため、未熟B細胞に発現する抗原を認識する493抗体でB細胞を分画して、代替軽鎖の発現を検討した。単離細胞中に最初から存在する代替軽鎖発現細胞は、多くが未熟B細胞である可能性が示されたが、それらを除去したB細胞においても、in vitro刺激に依存して代替軽鎖の発現が確認されたことから、末梢成熟B細胞において代替軽鎖が発現していることが示唆された。
    今後、このトランスジェニックマウスを用いた代替軽鎖解析系を用いて、末梢B細胞における抗体遺伝子再構成の機構について詳細な検討をする予定である。

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担当授業科目

  • SDGs:生命科学 (2021年度) 第4学期  - 木7~8

  • ヘルスシステム統合科学専門英語 (2021年度) 後期  - その他

  • ヘルスシステム統合科学特別研究 (2021年度) 通年  - その他

  • 先進病院実習 (2021年度) 前期  - その他

  • 分析化学 (2021年度) 1・2学期  - 木3,木4

  • 分析化学1 (2021年度) 第1学期  - 木3,木4

  • 分析化学2 (2021年度) 第2学期  - 木3,木4

  • 工学基礎実験実習 (2021年度) 1・2学期  - 火5,火6,火7,火8

  • 工学基礎実験実習 (2021年度) 1・2学期  - 火5,火6,火7,火8

  • 工学基礎実験実習 (2021年度) 1・2学期  - 火5,火6,火7,火8

  • 技術表現発表学 (2021年度) 後期  - その他

  • 技術表現発表学 (2021年度) 後期  - その他

  • 放射線安全利用工学2 (2021年度) 第2学期  - 金5,金6

  • 放射線安全利用工学及び実験 (2021年度) 1・2学期  - 金5,金6

  • 生化学3 (2021年度) 第1学期  - 火3,火4,金3,金4

  • 細胞工学 (2021年度) 第4学期  - 月3,月4

  • 細胞工学 (2021年度) 第4学期  - 月3,月4

  • 細胞機能工学 (2021年度) 前期  - 月1~2

  • 細胞機能開発学 (2021年度) 後期  - その他

  • ヘルスシステム統合科学インターンシップ (2020年度) 通年  - その他

  • ヘルスシステム統合科学専門英語 (2020年度) 後期  - その他

  • ヘルスシステム統合科学特別研究 (2020年度) 通年  - その他

  • 分析化学 (2020年度) 1・2学期  - 水3,水4

  • 分析化学1 (2020年度) 第1学期  - 水3,水4

  • 分析化学2 (2020年度) 第2学期  - 水3,水4

  • 技術表現発表学 (2020年度) 後期  - その他

  • 放射線安全利用工学2 (2020年度) 第2学期  - 金5,金6

  • 放射線安全利用工学及び実験 (2020年度) 1・2学期  - 金5,金6

  • 教養生物学(バイオテクノロジー) (2020年度) 特別  - その他

  • 教養生物学(バイオテクノロジー) (2020年度) 第4学期  - 木3,木4

  • 生化学3 (2020年度) 第1学期  - 火3,火4,金3,金4

  • 細胞工学 (2020年度) 第4学期  - 月3,月4

  • 細胞工学 (2020年度) 第4学期  - 月3,月4

  • 細胞機能開発学 (2020年度) 後期  - その他

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